Diagnostyka i profilaktyka zakae HIV, Mikrobiologia


Diagnostyka i profilaktyka zakażeń HIV

Rodzina: Retroviridae

Rodzaj: Lentivirus

Gatunek: Human immunodeficiency virus 1 (HIV-1)

Human immunodeficiency virus 2 (HIV-2)

Diagnostyka

Diagnostyka zakażenia HIV opiera się na badaniu krwi obwodowej i

wykrywaniu w niej:

I. cząstek wirusowych

- wirusowego RNA

- głównego białka wirusowego p24

II. Prowirusowego DNA w zakażonych komórkach

III. Redukcji liczby limfocytów T4

IV. Przeciwciał skierowanych przeciwko białkom wirusowym

Rutynowa diagnostyka - EIA, ELISA

Opiera się na wykrywaniu w surowicy krwi przeciwciał przeciwko

antygenom wirusowym

EIA:

-trwałe przyłączenie do podłoża (studzienki na płytce

diagnostycznej) antygenów wirusowych

-wlanie do studzienki testowanej surowicy

-wypłukuje się surowicę, a na ściankach studzienki zostają

połączone z antygenami przeciwciała [o ile badana surowica jest HIV(+)]

-do studzienki dodaje się połączonych z enzymem (peroksydazą

chranową, fosfatazą zasadową) przeciwciał zwierzęcych wykrywających ludzkie

immunoglobuliny. Powstaje "kanapkowy przekładaniec" (antygeny wirusa +

Ig-ludzkie przeciwwirusowe + Ig-zwierzęce przeciw Ig-ludzkim)

-dodaje się substratu który pod wpływem reakcji z enzymem

zmienia barwę, co oceniane jest następnie w kolorymetrze.

Obecnie używa się testów EIA III generacji charakteryzujących

się znaczną czułością przewyższającą Western Blot.

Testy potwierdzające pozytywny wynik EIA - Western Blot

Western Blot

przygotowanie odczynników

-rozdział ogólnej puli białek wirusowych na indywidualne

proteiny w procesie elektroforezy

-przeniesienie rozdzielonych białek wirusowych na nośnik -

nitrocelulozę

test

-inkubacja diagnozowanej surowicy z przygotowanymi w sposób

opisany powyżej paskami nitrocelulozowymi

-odpłukanie badanej surowicy. Gdy pacjent jest seropozytywny na

paskach pozostają jego Ig skierowane przeciwko Ag HIV.

-inkubacja pasków nitrocelulozowych z przeciwciałami zwierzęcymi

(połączonymi z enzymami - peroksydazą chrzanową i fosfatazą zasadową)

skierowanymi przeciwko ludzkim Ig

-dodanie substratu - powstają charakterystyczne prążki

odpowiadające poszczególnym białkom wirusowym, do których przyłączyły się Ig

badanego pacjenta.

Jako wynik pozytywny uznaje się wykrycie przeciwciał dla co

najmniej dwóch białek wirusowych będących produktami genów env, lub gag.

Najbardziej charakterystyczna jest reakcja z białkami wirusa

gp120, gp41, gp160 - dlatego stwierdzenie obecności przeciwciał przeciwko

tym białkom bez względu na obecność innych jest niezbędnym warunkiem dla

wykazania zakażenia.

Wykrycie tylko Ig przeciwko p24. lub p17 często jest związane z

występowaniem reakcji nieswoistej.

Najsilniej i najskuteczniej stymulują do wytwarzania przeciwciał

antygeny gp120, gp41 i p24, co jest wykorzystywane w przy określaniu stadium

infekcji i czasu zakażenia w fazie bezobjawowej.

EIA pozwala stwierdzić obecność przeciwciał przeciwwirusowych, a

Western Blot określa przeciwko którym konkretnym Ag przeciwciała zostały

wytworzone!

Ze względu na postęp techniki EIA, której czułość przewyższa Western

Blot zdarzają się rozbieżności w wynikach testów [ EIA(+), WB(-) ]. W takiej

sytuacji wykonuje się oznaczenia wirusowego p24, RNA HIV, PCR.

Testy wykrywające białko p24

Obecność białka p24 można stwierdzić po minimum 7 dniach od zakażenia.

Aż do momentu serokonwersji występuje w surowicy w postaci wolnej

niezbędnej do wiarygodnego oznaczenia. Po serokonwersji antygen występuje w

postaci kompleksów z odpowiednimi Ig. Kompleksy te nie są rozpoznawane przez

przeciwciała stosowane w testach!

Testy wykrywające p24 mogą być wykorzystane po serokonwersji dopiero

po uprzenim rozdysocjowaniu kompleksów.

Generalnie (specjalnie dla miłośników tego permanentnie nadużywanego

słowa) przydatność testów wykrywających antygen p24 ogranicza się do okienka

serologicznego.

Testy IV generacji wykrywające zarówno antygen p24 jak i przeciwciała

anty-HIV

testy IV generacji = testy EIA III generacji (wykrywające przeciwciała

anty-HIV) + testy wykrywające białko p24

Pozytywny wynik testów IV generacji, czyli zmiana koloru w studzience

na płytce testowej, oznacza że albo wyszedł pozytywnie test na przeciwciała

anty-HIV (EIA III), albo w badanej surowicy znajduje się białko p24, co

wymaga dalszej diagnostyki, dlatego test ten powinien być zweryfikowany

przez powtórzenie diagnostyki przy użyciu testów III generacji, a pozytywny

wynik testu III generacji potwierdza się testem Western Blot.

(szkoda że powyższe zdanie nie ma charakteru porównania, bo czuje że

mógłbym stanowić poważną konkurencję dla Homera)

Gdy test IV gen pozytywny, a III negatywny trzeba myśleć o świeżym

zakażeniu i okienku serologicznym, co potwierdzamy testem wykrywającym

białko p24. Jeżeli w tej sytuacji białko p24 zostaje wykryte, to robimy

jeszcze test na materiał genetyczny HIV-RNA w surowicy, lub HIV-DNA w

komórkach krwi obwodowej pacjenta.

Wszystkie wyżej opisane testy nie są przydatne w badaniu dziecka

zakażonej matki, gdyż w jego surowicy znajdują się matczyne przeciwciała

anty-HIV, a ewentualne białko p24 znajduje się w kompleksach. U noworodków

nosicielek wirusa HIV od razu wykonuje się PCR. Jeżeli badanie przy użyciu

łańcuchowej reakcji polimerazy jest pozytywne należy je powtórzyć z nowej

próbki surowicy.

Jeżeli badanie PCR u noworodka nosicielki HIV jest negatywne to należy

je powtórzyć w 14 dniu życia i po trzech miesiącach. Generalnie powtarzanie

jest matką nauki.

Badanie można również potwierdzić zakładając hodowle wirusowe. W

płynach z nad hodowli szuka się białka p24, a w komórkach z hodowli oznacza

się HIV-DNA przy użyciu PCR.

Szybkie testy

Opierają się na metodach aglutynacyjnych. Są do wykonania w 10-30min.

W Polsce gwałcąc opinię specjalistów i Ministerstwo Zdrowia (łakomy

kąsek) w 1999r zarejestrowano test HemaStrip, ale nie wiem czy jest on

obecnie dostępny w sprzedaży. Jak się dowiem, a zamierzam to dam znać.

Profilaktyka

Na temat profilaktyki pisał nie będę z racji na to iż nie chcę się

narazić mniejszościom seksualnym, ani być posądzonym o homofobię.

Prezerwatywy i tak nigdy nie zdobędą wystarczającej popularności(w

niektórych kręgach ich używanie nie jest trendy-95% pacjentów wenerologów),

a dentyści chwała Panu są na tyle drodzy że nikt do nich nie chodzi.

Pielęgniarce nie przetłumaczysz że ma nosić rękawiczki a ćpunowi że ma mieć

swoją strzykawkę.

Mogę tylko polecić blogi dwudziestoletnich nosicielek wirusa HIV

chwalących się tym że do puki są "zdrowe" i atrakcyjne ich celem życiowym

jest zarażenie jak największej ilości mężczyzn.



Wyszukiwarka

Podobne podstrony:
DIAGNOSTYKA, PROFILAKTYKA I LECZENIE OSTEOPOROZY 2
Postępowanie diagnostyczno profilaktyczno lecznicze w atopowym zapaleniu skóry
CHEMIOTERAPIA ZAKAE GRZYBICZYCH, Mikrobiologia
Diagnoza i profilaktyka pedagogiczn1(1)
DIAGNOSTYKA, PROFILAKTYKA I LECZENIE OSTEOPOROZY 3
Opis badań diagnostycznych w kierunku wykrycia HCV, Mikrobiologia, Mikrobiologia
HIV, Mikrobiologia
Systemowa teoria rodziny, Studia PEDAGOGIKA, Diagnoza i profilaktyka problemów w rodzinie
Diagnostyka bezpośrednia, Położnictwo WUM, Mikrobiologia, Notatki
Zasiłek stały, Studia PEDAGOGIKA, Diagnoza i profilaktyka problemów w rodzinie
Profilaktyka poekspozycyjna HIV
Diagnostyka, profilaktyka, leczenie osteoporozy

więcej podobnych podstron