Sprawozdanie IV
Pozyskiwanie mikroorganizmów o znaczeniu przemysłowym.

1. Pobranie próbek ze środowiska:

Zostało pobrane 5 g gleby leśnej i rozcieńczono je 45 pf buforu.

1. Testy na produkcję enzymów:
   

Podłoże	10^-4	10^-5	10^-6
Agar z trybutyryną	Ujawniły się grzyby i bakterie posiadające lipazy i hydrolizujące: Bakterie: białe i żółte wypukłe kolonie, gładki brzeg, okrągłe, Grzyby: Małe szarobrązowo-białe plechy Bakterie posiadające lipazy: 4 Grzyby posiadające lipazy: 10	Podobnie jak w rozcieńczeniu 10^-4 Grzyby posiadające lipazy: 1	Wyrosły grzyby niehydrolizujące: biała, watowata duża plecha.
Agar mleczny	Wyrosły bakterie i grzyby posiadające proteazy. Bakterie: okrągłe, jasnożólte kolonie, brzeg gładki, białe, małe gładkie, kolonie Grzyby: mała, biała zamszowa plecha Bakterie posiadające proteazy: 4 Grzyby posiadające proteazy: 2	Podobnie jak w rozcieńczeniu 10^-4 Bakterie posiadające proteazy: 1	Ujawniły się bakterie i grzyby nie posiadające protez: Bakterie: brzeg falowany, strzępiony, kolor beżowy Grzyby: watowata duża grzybnia powietrzna.
Podłoże Watsmana	Oprócz małych koloni pojawiła się jedna wielka kolonia bakterii prawdopodobnie rodzaju Bacillus Bakterie posiadające amylazy: 3 Grzyby posiadające amylazy:1	Ujawniły się bakterie i grzyby nie posiadające amylaz: Bakterie: brzeg falowany, strzępiony, kolor beżowy Grzyby: watowata duża grzybnia powietrzna.	Ujawniły się bakterie i grzyby nie posiadające amylaz: Bakterie: brzeg falowany, strzępiony, kolor beżowy Grzyby: watowata duża grzybnia powietrzna.

Tabela 1 Z otrzymanych wyników można odczytać, że bakterii i grzybów nie posiadających badanych przez nas enzymów było więcej w badanej próbce niż tych, które je posiadały. Świadczy o tym ujawnienie się tych bakterii i grzybów dopiero na płytkach z najmniejszym rozcieńczeniem, gdzie prawdopodobnie nie było już szukanych przez nas organizmów. Na płytkach o mniejszych rozcieńczeniach organizmy posiadające szukane przez nas enzymy wyparły inne drobnoustroje. Stało się tak dlatego, że jako źródło węgla mogły one wykorzystywać metabolity reakcji katalizowanych tymi enzymami.

• Ogólna liczba drobnoustrojów posiadających lipazy: 14

Liczba bakterii w 1 cm³:

• Ogólna liczba drobnoustrojów posiadających proteazy: 14

Liczba bakterii w 1 cm³:

• Ogólna liczba drobnoustrojów posiadających lipazy: 14

Liczba bakterii w 1 cm³:

Podłoże	10^-4	10^-5
Agar z trybutyryną	Ziarniaki G + Pałeczki G- Laseczki G+ Promieniowce (prawdopodobnie)	Ziarniaki G+ Pałeczki G-
Agar mleczny	Pałeczki G- Laseczki G+ Drożdże (prawdopodobnie)	Ziarniaki G+
Podłoże Watsmana	Pałeczki G- Laseczki G+	Laseczki G+

Tabela 1 Wyizolowane mikroorganizmy posiadające dane enzymy- barwienie Gramma

Przykładowe gatunki, które mogliśmy wyizolować:

• Bakterie posiadające proteazy:

Bacillus subtilis,

Pseudomonas aeuroginoza,

Streptomyces griseus,

• Grzyby posiadające proteazy:

Aspargilius flavus,

A. oryzae

A. fumigatys

• Bakterie posiadające lipazy:

Bacilius

Micrococcus casteolyticus- prawdopodobne po porównaniu cech makroskopowych koloni- żółte, małe, gładkie brzegi

Pseudomonas nitroreducens

• Grzyby posiadające lipazy:

Rhizopus lipolitycus

Aspargilius niger

Penicillium

• Bakterie posiadające amylazy:

Bacilius subtilis

Bacilius licheniformis

Enterobacter megaterium

• Grzyby posiadające amylazy:

Aspargilius oryzae
A. avamori
Rhizopus delmar

1. Test selekcyjny- metoda gradientu stężeń:

Bakterie: braki wzrostu na całej wielkości pożywki

Grzyby: wzrost na połowie płytki w której stężenie Pb²⁺ było najmniejsze.

Plecha grzyba była watowata, biało-szaro-brązowa, duża, nie została wydzielona żadna substancja.

Pod mikroskopem można było widzieć sporangiofor, rozszerzającą się na szczycie kolumienkę, okrąglą kolumellę uwypuklającą się do zarodni. Po budowie i środowisku życia można wnioskować, że grzyb ten to Mucor sp., albo Apsidia sp.

Powołując się na literaturę, możemy przypuszczać, że wyizolowany gatunek to Apsidia coerulea, która wiąże ołów 351 mg/g s. m.

Wnioski:

Bakterie obecne w ziemi leśnej nie tolerują ołowiu w pożywce, natomiast grzyby są bardziej oporne na wyższe stężenia ołowiu. Ale mimo wszystko obecność tego metalu ciężkiego doprowadza do zmian w morfologii grzyba. Z obserwacji makroskopowej można wywnioskować, że plecha grzyba jest mniejsza niż normalnie, bardziej zbita w kierunku malejącego stężenia Pb2+. Po obserwacji mikroskopowej stwierdzamy, że zarówno konidia jak i strzępki grzyba są mniejsze niż normalnie.