Data :04.12.15
Tytuł ćwiczenia: Wyznaczanie toksyczności za pomocą testu TTC.
Zajęcia laboratoryjne z Biochemii.
Grupa: Biotechnologia Iśie 1a
Skład Sekcji:
1. Jonatan Deperas
3. Patrycja Superniok
4. Rafał Sznura
Cel ćwiczenia : Wyznaczenie toksyczności rezorcyny za pomocą testu TTC.
Tabela 1-Wyniki pomiarów absorbancji z Spekol 11 dla wyznaczenia toksyczności rezorcyny
| Absorbancje | Średnie |
|---|---|
| 0,131 | 0,127 |
| 0,123 | |
| 0,084 | 0,0905 |
| 0,097 | |
| 0,074 | 0,0825 |
| 0,091 | |
| 0,075 | 0,0805 |
| 0,086 | |
| 0,062 | 0,0685 |
| 0,075 | |
| 0,08 | 0,082 |
| 0,084 | |
| 0,078 | 0,0835 |
| 0,089 |
Obliczenie stężenia TF
wzór krzywej wzorcowej:
y=21,057*x-0,1972
sposób obliczania:
y1=21,057*0,127-0,1972=2,48 [mg TF/dm3]
Tabela 2-Obliczone wartości stężenia TF
| Stężenie TF [mg TF/dm3] |
|---|
| 2,48 |
| 1,71 |
| 1,54 |
| 1,50 |
| 1,25 |
| 1,53 |
| 1,56 |
Obliczenie aktywności dehydrogenaz
wzór:
AD=TF/t [mg TF/dm3*h]
t=41,5 min (uśredniony czas inkubacji próbek, różnica w czasie inkubacji między najkrócej i najdłużej inkubowana próbka na poziomie 1 minuty)
sposób obliczania:
AD1=(2,48/41,5)*60=3,58[mg TF/dm3*h]
Tabela 3-Obliczone aktywności dehydrogenaz
| Aktywność dehydrogenaz [mg TF/dm3*h] |
|---|
| 3,58 |
| 2,47 |
| 2,23 |
| 2,17 |
| 1,80 |
| 2,21 |
| 2,26 |
Obliczenia stopnia toksyczności
wzór:
ST=[(AD0-ADT)/ AD0]*100%
sposób obliczenia:
ST2=[(3,58-2,47)/3,58]*100%=31,03% (oznacza, że 31% populacji mikroorganizmów zginęło)
Tabela 4-Obliczone stopnie toksyczności
| Stopień toksyczności [%] |
|---|
| 0% |
| 31,03% |
| 37,83% |
| 39,53% |
| 49,73% |
| 38,25% |
| 36,98% |
Obliczenie stężenia rezorcyny
sposób obliczenia:
100 ml-3 g
0,2 ml-x g
x=0,006 g
y=x*10=0,06 g/100 ml
Cr=0,06%
Tabela 5-Obliczone stężenia rezorcynu (substancji toksycznej)
| Stężenie rezorcyny(Cr) [%] |
|---|
| 0% |
| 0,06% |
| 0,09% |
| 0,12% |
| 0,18% |
| 0,24% |
| 0,30% |
Tabela 6-tabela zbiorcza
| Nr. | Stężenie rezorcyny Cr(%) | Stopień toksyczności ST(%) | 1/Cr | 1/ST |
|---|---|---|---|---|
| 1 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 2 | 0,06 | 31,03 | 16,67 | 0,032 |
| 3 | 0,09 | 37,83 | 11,11 | 0,026 |
| 4 | 0,12 | 39,53 | 8,33 | 0,025 |
| 5 | 0,18 | 49,73 | 5,55 | 0,020 |
| 6 | 0,24 | 38,25 | 4,16 | 0,026 |
| 7 | 0,30 | 36,98 | 3,33 | 0,027 |
Obliczenie STmax i K:
z równania prostej y=0,0013x+0,013 wyznaczamy punkty przecięcia z osiami współrzędnych
y=0,0013*0+0,13
1/STmax=y=0,013
1/STmax=0,013
STmax=76,92
0=0,0013x+0,013
-1/K = x = -10
-1/K = -10
K=0,1
Wnioski:
Punkty pomiarowe zgodziły sie z krzywą która została obliczona w bardzo dużym stopnia, za wyjątkiem dwóch ostatnich punktów które ewidentnie odbiegają od obliczonej krzywej, jednak było to do przewidzenia od samego początku, gdyż pozostałe wyniki wykazywały tendencje liniową, natomiast 2 ostatnie pomiary zupełnie od tej tendencji odbiegały. Spowodowane mogło to być albo przez jakiś błąd podczas przygotowywania próbek, albo przez słabą jakość aparatu pomiarowego, co jest bardziej prawdopodobne, gdyż w przypadku wcześniejszych pomiarów także występowały duże odchylenia od wartości pomiarowych, w przypadku pomiarów mających na celu wyznaczenie optymalnego stężenia TTC na wykresie zamiast krzywej Gaussa powstały góry Kaledońskie :D i nie pomogła nawet obróbka danych polegająca na odrzuceniu najbardziej absurdalnych pomiarów .
Tabela 7- Wyniki pomiaru absorbancji dla określenia optymalnego czasu inkubacji
| Czas[min] | Absorbancja |
|---|---|
| 10 | 0,232 |
| 20 | 0,368 |
| 30 | 0,412 |
| 40 | 0,538 |
| 50 | 0,619 |
Wnioski:
Na podstawie uzyskanych wyników można stwierdzić, że przyrost ilości TF jest względnie liniowy w całym badanym okresie czasie. W związku z tym, jako optymalny czas inkubacji można teoretycznie wybrać dowolny czas z badanego przedziału, jednak w celu zapobiegnięcia błędom w czasie doświadczenia najbezpieczniej wybrać czas z środka badanego przedziału, co da nam największą pewność że przyrost TF będzie liniowy nawet w przypadku drobnej zmiany jakichś parametrów w trakcie właściwego doświadczenia.
Tabela 8-Wyniki pomiarów absorbancji przy określaniu optymalnego stężenia TTC
|
|
|---|---|
| 0,87 | 0,832 |
| 0,794 | |
| 0,873 | 0,888 |
| 0,903 | |
| 0,557 | 0,7005 |
| 0,844 | |
| 0,862 | 0,878 |
| 0,894 | |
| 0,72 | 0,6 |
| 0,48 | |
| 0,745 | 0,682 |
| 0,619 | |
| 0,674 | 0,6595 |
| 0,645 |
Tabela 9- Obliczone stężenie TTC w próbce i odpowiadające mu uśrednione absorbancje
| Stężenie TTC [%] | Średnia Absorbancja |
|---|---|
| 0,4 | 0,832 |
| 0,6 | 0,888 |
| 0,8 | 0,7005 |
| 1 | 0,878 |
| 1,4 | 0,6 |
| 1,6 | 0,682 |
| 2 | 0,6595 |
Wnioski:
Wykres sporządzony na podstawie uzyskanych pomiarów odbiega bardzo znacznie od przewidywanego kształtu krzywej Gaussa, co świadczyć może o niedokładnym przygotowaniu próbek, lub co bardziej prawdopodobne dużej niedokładności i małej powtarzalności wyników z urządzenia na którym zostały przeprowadzone pomiary (wszystkie grupy otrzymały wyniki odbiegające znacznie od oczekiwanych, i co ważniejsze niezgodne z logicznym rozumowaniem). W związku z tym w przypadku pomiarów w których różnica pomiędzy pomiarami wyniosła powyżej 0,13, pomiar o mniejszej wartości został odrzucony jako błąd gruby . Nie jest to naukowy sposób na obróbkę danych ale biorąc pod uwagę to, że wiadomo jaki kształt powinna mieć krzywa można chyba przyjąć taką metodę jako dopuszczalną w tym wypadku.
Tabela 10-Wyniki pomiarów absorbancji przy określaniu optymalnego stężenia TTC (po obróbce)
| Absorbancje po "obróbce" | Średnie po "obróbce" |
|---|---|
| 0,87 | 0,832 |
| 0,794 | |
| 0,873 | 0,888 |
| 0,903 | |
| 0,844 | |
| 0,844 | |
| 0,862 | 0,878 |
| 0,894 | |
| 0,72 | 0,72 |
| 0,745 | 0,682 |
| 0,619 | |
| 0,674 | 0,6595 |
| 0,645 |
Wnioski:
Wnioskując z wykresu proponowane optymalne stężenie to 0,6% lub 1%. Na podstawie uzyskanych wyników trudno określić, właściwie optymalne stężenie, ale biorąc pod uwagę to, że nie duże odchylenia stężenia TTC nie powinny mieć wpływu na przebieg doświadczenia można by założyć, że stężenie 0,8% da nam największą szansę na w miarę dokładny wynik doświadczenia. Można też wykonać wszystko od początku, żeby uzyskać dokładniejsze wyniki ;)