Ćwiczenie 4
Enzymy wytwarzane przez mikroorganizmy
Zadanie 1.1Wykrywanie amylaz produkowanych przez drobnoustroje
Materiały: płynne hodowle szczepów mikroorganizmów, probówki z podłożem zawierającym skrobię (20 ml)
Podłoże: Pepton 10g/l K2HPO4 0,3g/l NaCl 0,5g/l CaCO3 3g/l |
MgSO4•7H2O 1g/l (NH4)2SO4 2g/l skrobia 10g/l agar 25g/l (pH 7,0) |
Z hodowli płynnych 3 dowolnie wybranych szczepów pobrać po 5 ml i odwirować przez 5 min w 6000 rpm.
Osady odrzucić a supernatanty pozostawić do badań.
Wylać na płytki Petriego 10 ml podłoża ze skrobią i pozostawić do zastygnięcia.
Po zastygnięciu poustawiać 3 wyjałowione cylinderki i wylać pozostałą część podłoża ze skrobią.
Po zestaleniu się podłoża wyjąć delikatnie cylinderki a do powstałych studzienek przenieść po 200μl supernatantów pozostałych po odwirowaniu mikroorganizmów.
Inkubować płytki w temperaturze 28-30oC
Po inkubacji zalać płytki płynem Lugola i obserwować strefy przejaśnień wokół studzienek.
Zadanie 1.2 Wykazywanie aktywności proteolitycznej różnych drobnoustrojów.
Materiały: płynne hodowle odpowiednich mikroorganizmów, szalki Petriego z agarem mlecznym, jogurt naturalny
Wykonanie:
Wykonać posiew ezą danego szczepu bakteryjnego na płytkę z agarem mlecznym (luźny zygzak)
Ogrzewać hodowlę bulionową danego szczepu bakteryjnego w 80ºC przez 10 min.
Po tym czasie wykonać posiewy analogicznie jak w pkt 1.
Po inkubacji obserwować występowanie jaśniejszych stref w otoczeniu wyrosłych kolonii.
W przypadku niejednoznacznego odczytu nanieść TCA na płytkę.
Zadanie 1.3 Oznaczanie lipolitycznych zdolności drobnoustrojów.
Materiały: płynne hodowle odpowiednich mikroorganizmów, sterylne szalki Petriego, sterylne podłoże stałe Spirit blue, sterylny reagent lipazowy.
Wykonanie:
Do 50 ml rozgrzanego do 50 ̊C podłoża stałego Spirit blue dodać sterylnie 1,5 ml reagentu lipazowego. Intensywnie wymieszać. Tak przygotowane podłoże lipolityczne wylać na dwie szalki Petriego.
Po zastygnięciu podłoży na jednej płytce wykonać posiew ezą szczepu kontrolnego, a na drugiej płytce posiew szczepu badanego. (kreska)
Po inkubacji obserwować występowanie jaśniejszych stref w otoczeniu wyrosłych kolonii.
Pytania: 1.Wymienić wszystkie klasy i napisać jakie reakcje katalizują 2.Opisać proteazy (do jakiej klasy należą, co jest substratem jakie wiązania tną grupy proteaz zastosowania)
Mikrobiologia przemysłowa