BUDOWA MIKROSKOPU:

MECHANICZNE: *statyw z podstawką-zapewnia sztywność całej konstrukcji *stolik-służy do umocowania preparatu i jego przesuwu w poziomie w osiach X,Y *rewolwer-obiektywy mikroskopu są osadzone w gniazdach obrotowej tarczy- rewolweru, jego obracanie umożliwia prosta zmianę obiektywu tym samym używanego powiększenia * tubus-przestrzeń pomiędzy obiektywem a okularem, w której następuje formowanie się obrazu * śruba mikro- i mikrometryczna- śruba mikrometryczna służy do uchwycenia kontrastu obrazu natomiast śruba mikrometryczna służy do regulacji ostrości

OPTYCZNE: *okular- służy do powiększania(i obserwacji ocznej)obrazu tworzonego w obiektywie *obiektywy- zbierają światło wychodzące z przedmiotu i tworzą jego powiększony obraz *urządzenie oświetlające(kondensor lusterko) *kondensor- jest wtórnym źródłem oświetlenia, bezpośrednio oświetla przedmiot

BŁONA PÓŁPRZEPUSZCZALNA- jest to rodzaj membrany która jest w stanie przepuszczać niektóre rodzaje cząsteczek a zatrzymywać inne
OSMOZA- przenikanie roztworów do wnętrza komórki przez błonę komórkową

PLAZMOLIZA- kurcznie się cytoplazmy w wyniku utraty wody gdy komórka umieszczona jest w środowisku hipertonicznym; w komórkachroslinnych w wyniku plazmolizy błona komórkowa odłącza się od sciany komórkowej

DEPLAZMOLIZA- Deplazmoliza - proces odwrotny do plazmolizy, polegający na pobieraniu wody przez komórkę zanurzoną w roztworze hipotonicznym.

ROZTWORY IZOTONICZNE- roztwór, którego stężenie jest w równowadze z stężeniem soku komórkowego

ROZTWORY HIPERTONICZNE- roztwór którego steżenie jest wieksze niż stężenie soku komórkowego

ROZTWORY HIPOTONICZNE- roztwór którego stężenie jest większe niż stężenie soku komórkowego

	BAKTERIE	ROŚLINY	ZWIERZETA
Przynależność systematyczna
Organizacja materiału genetycznego
Organelle komórkowe
Rozmiary
Substancje zapasowe
Podziały komórkowe
Odzywanie

Metoda Grama - metoda barwienia bakterii. Pozwala doświadczalnie zróżnicować te organizmy na dwie duże grupy (Gram-dodatnie i Gram-ujemne) ze względu na różnice w budowie ściany komórkowej oraz, co za tym idzie, także pewne różnice w fizjologii i podatności na leki.

Sposób barwienia

• na odtłuszczone szkiełko podstawowe nanieść bakterie i po ewentualnym dodaniu płynu fizjologicznego wykonać rozmaz

• szkiełko z rozmazem pozostawić do całkowitego wyschnięcia, po czym preparat utrwalić przez trzykrotne przesunięcie nad płomieniem palnika

• utrwalony preparat zalewać nad rynienką roztworem fioletu krystalicznego

• odczekać 60 sekund

• tryskawką delikatnie zmyć barwnik

• zalać preparat jodyną lub płynem Lugola

• odczekać 30 sekund

• ostrożnie odbarwić całość w etanolu przez ok. 10-20 sekund

• spłukać preparat wodą

• dobarwić innym barwnikiem, np. safraniną czy fuksyną zasadową przez ok. 30 sekund

• dobrze spłukać preparat wodą i oglądać pod mikroskopem

Mechanizm barwienia

1. Komórki bakteryjne, zarówno gramdodatnie, jak i gramujemne, zabarwiają się fioletem krystalicznym.

2. Dodanie płynu Lugola powoduje, że fiolet reaguje z jodem, w wyniku czego tworzą się stosunkowo duże kompleksy złożone z barwnika i jodu. Na tym etapie obydwa typy komórek mają zabarwienie granatowe.

3. Płukanie w alkoholu powoduje, że w komórkach Gram-dodatnich następuje zmniejszenie pustej przestrzeni w wielowarstwowych ścianach komórkowych, mających wygląd wielu (ok. 50) nałożonych na siebie siatek. W rezultacie kompleksy fioletu krystalicznego z jodem nie mogą ulec wypłukaniu, co w przypadku 1-2 warstw u bakterii Gram-ujemnych nie jest przeszkodą i alkohol świetnie wypłukuje barwnik.

4. Po zakończonym płukaniu komórki Gram-dodatnie są granatowe, zaś Gram-ujemne - bezbarwne.

5. Dodatkowy barwnik (np. safranina, fuksyna) dobarwia, niezbyt mocno, komórki Gram-ujemne, nie zmieniając barwy komórek Gram-dodatnich.

Efekt barwienia Grama

W efekcie wyżej przedstawionych działań i opisanego mechanizmu komórki efekty mogą być trojakie:

• bakterie barwią się na kolor ciemno-fioletowy, prawie czarny, określamy jako Gram-dodatnie lub (Gram +)

• bakterie barwią się w kolorze czerwonym, określamy jako Gram-ujemne lub (Gram -)

• bakterie nie barwią się w ogóle metodą Grama

Płyn Lugola Jod jest w wodzie bardzo trudno rozpuszczalny, ale dzięki dodatkowi jodku potasu, który jest w tym roztworze solubilizatorem, można otrzymać roztwór jodu.

---