Typ : Firmicutes

Klasa : Mollicutes

Rząd : Mycoplasmatales

Rodzina : Mycoplasmaceae

Rodzaj : Mycoplasma

Rodziaj: Ureplasma

Mycoplasma

Gatunki:

M.mycoides subs. Mycoides - u bydła (tworzy małe kolonie)

M.mycoides subs. capi - zapalenie płuc (tworzy duże kolonie)

M.capricolum subs. capricolum - zaraza płucna u kóz

M.capricolum subs. Capripneumoniae - zapalenie płuc kóz, owiec (lżejsza forma)

M.bovis - mastitis

M.bovigenitalium - atakuje drogi rodne krów

M.agalactiae - bezmleczność kóz I owiec

M.hyopneumoniae - zapalenie płuc świń

M.hyorhinitis - zapalenie stawów świń młodszych

M.hyosynoviae - zapalenie stawów świń starszych

M.meleagridis

M.synoviae U PTAKÓW

M.gallisepticum

M.haemocanis

M.haemofelis Tworzą oddzielną grupę wcześniej zaliczaną

M.suis do innego rodzaju.

MORFOLOGIA

- brak ściany komórkowej !!!

Otoczone 3-warstwową błoną komórkową z dużą ilością steroli, dlatego są

bardzo wrażliwe na wysuszenie, detergenty i warunki środowiska.

- G- ale nie da się barwić Gramem ze względu na brak ściany komórkowej, przez co

nie stosuje się badania bezpośredniego.

- Cechuje się wielki polimorfizm: od ziarniaków 0,3-0,5um przez formy gruszkowate,

pałeczki, do form rozgałęzionych o dużych rozmiarach.

Przechodzi przez filtry 0,45um.

- oporne na wszystkie antybiotyki działające na ścianę komórkową.

- jeżeli hodujemy różne bakteria w wielu pasażach z penicyliną to stają się one podobne do

Mycoplasma (tzw. Formy L). Pasaże bez penicyliny przywracają im ścianę.

Hodowla z pierwszego pasażu

Zawsze trzeba wysiewać na dwie płytki:

1. Inkubacja w warunkach tlenowych z dodatkiem 5-10% CO₂

2. Inkubacja w warunkach beztlenowych 95% azotu + 5% CO₂

Rosną na podłożach sztucznych do 3 tygodni

pH 7,5-8

Wymagają steroli - kwasów tłuszczowych

Małe kolonie od 300-600um - niewidoczne gołym okiem

Charakterystyczny wygląd kolonie - sadzone jajko.

BIOCHEMIA

cukry+ (bez gazu) ale może być

laktoza - różnie

rozkład argininy + cecha różnicująca

rozkład mocznika - z Ureoplasma

WIRULENCJA

- bakteria zewnątrzkomórkowa

- białka adhezyjne

Mogą zmieniać konfigurację ze względu na rodzaj receptorów komórek makroorganizmu,

- białko wiążące receptory glikoproteinowe kwasu sjalowego.

Powoduję zatrzymanie ruchu rzęsek górnych dróg oddechowych

co ułatwia kolonizację, powodują rozpad komórek nabłonka.

- po przyczepieniu do komórki same nie wnikają do wnętrza, wprowadzają tylko

same metabolity : H₂O₂ i rodniki tlenowe - zabijanie komórek.

- niektóre wytwarzają hemolizyna alfa - krew końska - hemoliza alfa.

- cała bakteria działa jak superantygen :

Aktywacja makrofagów -> cytokiny prozapalne -> odczyn zapalny

(zwłaszcza płuc i gruczołu mlekowego)

- produkują enzymy - KASPAZY - proteazy wnikające do komórek

powodujące ich apoptozę.

DIAGNOSTYKA

Materiał do badań należy transportować jak najszybciej, najlepiej w specjalnych podłożach.

Do badań pobiera się wymazy z górnych dróg oddechowych, popłuczyny z górnych dróg oddechowych, płyny z jam ciała, płyny stawowe, mleko z dodatkiem ampyciliny.

- Brak badania bezpośredniego

Chyba że badanie metodami fluorescencji - ale rzadko.

- zakażanie 7 dniowych zarodków kurzych - do woreczka żółtkowego

Po 2 dniach następuje śmierć zarodka - izoluje się Mycoplasma.

- Podłoże Edwardsa - stałe

- Podłoże PPLO - płynne

Są one bardzo bogate

• Wyciąg z serca wołowego

• Wyciąg drożdżowy

• Peptydy i aminokwasy

• Surowica końska

• 
  Penicylina

Siejemy 2 razy w różnych warunkach - tlenowe, beztlenowe.

- Płyny do badania często rozcieńczamy bo mogą być enzymy

i przeciwciała które mogą hamować wzrost bakterii.

- 37^o przez 3-4 tygodnie pobierając krople co tydzień do badania.

- charakterystyczny wygląd sadzonego jaja.

Metoda Dienesa

- wyrośnięte kolonie zalewamy błękitem metylenowym

Kolonie zabarwiają się na niebiesko co można obserwować pod mikroskopem.

Metoda z digitoniną

- nasączamy krążek bibuły digitoniną kładziemy na kolonie.

Jeśli nastąpi zahamowanie wzrostu to oznacza że jest to Mycoplasma.

Identyfikacja antygenu

- metoda fluorescencyjnych przeciwciał

- immunoperoksydazowa

- ELISA

- OWD

- precypitacja w żelu z surowicą odpornościową

Identyfikacja przeciwciał

- hemaglutynina alfa - test precypitacji płytkowej ????/

OWD, ELISA, test lateksowy

Antybiotyki :

- Tylozyna

Dodaje się tylozyny do hodowli komórkowych bo Mycoplasma często zakaża hodownle.

UREOPLASMA

Gatunki:

Ureoplasma diversum - atakuje narządy rozrodcze

Ureoplasma urealyticum - zakażenie pęcherza moczowego u ludzi.

Informacje ogólne takie jak u Mycoplasma z drobnymi różnicami.

Ureoplasma zabarwia się na brązowo po nakropieniu na kolonie 10% mocznika.

	Mycoplasma	Ureoplasma
Rozmiar kolonii	300-600um	50-100um
Hydroliz mocznika	-	+ (bardzo dobrze)
Hydroliza Argininy	+	-
Wybarwianie błękitem	+	-
Wzrost	Wolny 7-21 dni	Do 7 dni
pH	5-8	pH kwaśne
Podłoża	Podłoże Edwardsa	Podłożę Hayflicka To samo co Edwardsa + mocznik i czerwień fenolowa wykazująca rozkład mocznika

HAEMOPLASMA

- charakterystyczną cechą jest przenoszenie przez wektory (pchły i inne stawonogi)

- nie rosną na podłożach - wykazując ich obecność barwi się krew metodą Giemsy -

widzimy wtedy drobne bakterie (0,1-0,2um)przyczepione do erytrocytów.

Diagnoza także przez PCR - ale rzadziej.

Objawem jest anemia.

Typ : Spirochaetes

Klasa : Spirochaetaes

Rząd : Spirochaetaceae

Rodzina : Mycoplasmaceae

Rodzaj : Borelia

Gatunek: B.burgdorferi sensu stricto

B.burgdorferi sensu lato - w trakcie badań

Rodzaj : Treponema

Gatunek : T.pallidum - syfilis

T.paraluiscuniculi - atakuje drogi rodne królików.

Rodzina : Leptospiraceae

Rodzaj : Leptospira

Gatunek: L.biflexa - mało patogenna

L.interrogans - bardzo patogenna

L.interrogans subs. interrogans - najbardziej patogenna

weillii

kirscheri

santarosi

Metodą aglutynacji krwi króliczej wyróżniono serowary :

Serowary L.interrogans subs. interrogans (pisane z dużej litery - nie gatunek)

- L. Icterohaemorrhagiae - atakuje wątrobę

- L. Pomona - płuca

- L. Canicola - psy

Rodzina : Brachyspiraceae

Rodzaj : Brachyspira

Gatunek : Brachyspira hyodysenteriae

Krętki - charakterystyczna helikalna budowa komórki (spiralna).

Posiadają liczne spiralki a odległości między nimi to amplitudy.

Komórka zbudowana z walca o podobnej budowie do każdej komórki

Za peptydoglikanem znajduje się błona zewnętrzna a w niej nawinięte na cylinder

włókna osiowe.

Narząd ruchu - różni się od rzęsek tym że nie wychodzą paza komórki

znajdują się między peptydoglikanem a błoną zewnętrzną.

Poszczególne rodzaje różnią się ilości włókien osiowych.

Włókna osiowe układają się na biegunach i przyczepione są do dysków przyczepu.

	Leptospira	Brachyspira	Borelia
Spirale \ amplituda	Liczne\ 0,1um	6-16 \ 1um	4-8 \ do 3um
Włókna osiowe	2	6-10	15-20
Dyski przyczepu	2	1	2
Warunki tlenowe	Tlenoe	beztlenowe	Tlenowe + 5-10% CO22
Wektory	-	-	+
Ruch falujący	+	+	+
Barwienie	-	Fuksyna	fuksyna

LEPTOSPIRA

Hodowla

- 12-15^oC \ patogenna 30^oC

- pH lekko zasadowe 7,2-7,6

- rośnie tylko na podłożach płynnych

Biochemia

- cukry -

- katalaza +

- oksydaza +

- lipaza +

Wirulencja

- dostaje się przez nieuszkodzoną błonę śluzową lub otarcia nabłonka.

- wiąże się z fibronektyna na powierzchni komórki,

Dostaje się do wnętrza drogą endosomu i jest roznoszona przez krew.

Atakuje hepatocyty, wzrost poziomu transaminaz i mogą wystąpić objawy żółtaczki.

Po 7-10 dniach pojawiają się przeciwciała więc Leptospira przechodzą do kanalików

nerkowych, ciężarnej macicy, spojówek, opon mózgowych.

Zapalenie nerek - Leptospira w moczu, wytwarza leptospironazy i uszkadzają

nabłonek - krew w moczu.

- apoptoza fagocytów - mechanizm nieznany

- proteazy, glikoproteazy - cytotoksyczność

Do badania

Mocz- głównie

Pośmiertnie - nerki, inne narządy

Do 20 minut od pobrania moczu po odwirowaniu w ciemnym polu widać ruch.

Jeżeli dłużej to należy dodać 1,5 ml 10% formaliny na 20 ml osocza -

-dłuższa konserwacja

Hodowla

- tylko i wyłącznie podłoża płynne !!!!

- 30^oC + interrogans.

- 3-4 tygodnie- co tydzień pobieramy krople do badań i sprawdzamy w ciemnym polu.

Podłoże Karthofa Zawierają surowice króliczą

Stewarda hemoglobinę z erytrocytów barana

Fletchera albuminę bydlęcą

Noguchiego tween - zawiera kwasy tłuszczowe ???

Próba biologiczna

Gerbile i młode świnki - dootrzewnowo, mogą padać dopiero po 3 tygodniach

Krew z serca - sprawdzanie na obecność przeciwciał.

Test MAT - mikrotest aglutynacji

Rozcieńczmy surowicę - kolejno

0,2 każdego rozcieńczenia + 0,2 badanej hodowli.

W komorze wilgotnej w temperaturze pokojowej 2 godziny.

Pod wpływem przeciwciał tworzą się świecące kule (dezintegracja bakterii)

Miano graniczne: 50% Leptospira uległo dezintegracji

Miona 100 - i więcej - zakażenie.

---