R charakt aminokwasów

Reakcja z ninhydryna 1cm badanego aminokw i 0,5cm ninhydryny wymieszac w prob i ogrzewac nad palnikiem w wrzenia. Po chwili pojawiw się fioletowe zabarw, a w przyp proliny i hydroksyproliny zabarw żółte

Reakcja na gr tiolowa -SH 1cm 0,05% cystyny lub cysteiny i 2-3kr 20%NaOH ogrzewac w probówce nad palnikiem do wrzenia. Nast. Dod 3-4kr nasyconego ru octanu ołowiu i dalej podg(do odparowania polowy plynu). Wytraca się czarny siarczek ołowiu, z którego po dodaniu kilku kr st HCl wydziela się siarkowodór.

Reakcja na wykrycie pierścienia indolu (Pr Adamkiewicza) 1cm ru tryptofanu dod kilka kr kwasu octowego lodowatego i wymieszac dokladnie w probowce, nastepnie plyn podwarstwic stężonym kwasem siarkowym. Na granicy płynów pojawia się fioletowy pierścien

Wykrycie piersi imidazolowego w reakcji z kw paradwuazobenzeno-sulfonowym Sporzadic kwas p-dwuazobenzenosulfonowy przez zmieszania 1cm 0,5%kw sulfanilowego i 1 cm 0,5% NaNO2. ru zobojętnić krystalicznym Na2CO3 dodajac do prob weglanu tak duzo dopóki ru się burzy. Dod histydyny i obserwowac tworzenie się barwy pomarańczowo-zoltej

Reakcja na pierścień aromatyczny. Pr ksantoproteinowa. 2cm tryptofanu lub tyrozyny zalac 2cm st HNO3 i podgrzewac kilka min na łw. Ru przybiera barwe zołtą. Oziębić, zalkalizować 20%NaOH. W miare dodawania lugu rozwija się barwa pomarańczowa

Wykazanie amfoterycznych wl amino 2 zlweki na 100cm dod 10cm 0,1M ru glicyny. Ru z 1zlewce miareczkowac potencjometrycznie HCl, a 2ga marecz NaOH. Miareczkow kwasem: zmierzyc wyjściowe pH ru glicyny i stopniowo dod po0,5cm 0,1M HCl, mierzac pH. Po dod 3cm kw zwiększyć porcje dodaw kw do1cm. Pomiar zakończyć po dod12cm kw. Miareczkowanie lugiem: zmierzyc wyjsc pH ru g i dod po0,5cm 0,1M NaOH pomiaru pH dokonywac na pHmetrze lub za pomoca czulych papierkow wskaź. Wykreślić krzywa potencjometrycznego miareczkowania nanosząc na os odcietycz ilość cm kw i lugu a na os rzednych wartość pH. Z wykresu odczytac wartość pK dla kw i lugu oraz wartość pJ.

Rozdzial aminokw met chromatografii rozdzielczej z bibuły Whatman 1 wyciac pasek o szer 15cm i dl 22cm. W odl2cm od dolu zaznaczyc miękkim otokiem linie atartowa i nanieść mikropipete miaszanine badanych aminokwasow oraz wzorce. Po wysuszeniu plam zawiesic pasek na pręciku szklanym i czasu chromatograf wyjac z komory, wysuszyc w suszarce w temp 100st. Zwilżyć pasek roztw ninhydryny w acetonie lub izatny w acetonie i ponownie wysyszyc.

Wykrywanie wiazania peptydowego- reakcja biuretowa 2suche Pr wsypac po ok.0,2g mocznika. Jedna prob ogrzewać nad palnikiem Az do momentu stopienia mocznika i wydzielenia amoniaku(powstaje biuret). Po ostudzeniu do obu Pr dod 2cm wody. Do trzeciej prob odmeirzyc 2cm ru kazeiny. Do wszystkich3pr dod 2cm 10%NaOH i 3-4kr 1% ru CuSO4. w obecności wiazan peptydowych pojawia się Bara od rozu do fioletu

Wykr reszt nieaminokw w balkach zl

A wykr reszt fosforanowej reakcja fiske-subbarowa do1pr odmierzyc 1cm ru kazeiny do2giej 1cm ru bialka jeje kurzego. Do obu dod 1cm 5M kw siarkowego. Całość ogrzewac we wlw przez10min, oziębić i zobojętnić 1cm 10%ru amoniaku. Nastepnie dod 1cm 2,5% ru molibdenianu amonowego w 2,5M kw siarkowym i 1cm reduktora metolowego

B wykr reszty cukrowej w glikoproteinach do 5ml ru sliny dod pare kr 0,1M ru kw octowego. Wytraca się klaczkowaty osad mucyny. Zebrac bagietka i przenieść do prob. Do2giej Pr przeniesc 2cmru kolagenu a do3 2cm ru biakla jaja kurz. Do wszyst dod po 3cm st HCl i gotowac przez kilk min. W obecności glikoprotein ru stopniowo zabarwia się na fiolotow

Cukry reakcje ogolne

Próba Molischa z α-naftolem. 1cm r-u cukru, dodac 2-3krople 5% etanolowego r-u α-naftolu, wymieszać i ostrożnie podwarstwie 2cm stęż H2SO4. w obecności cukrów na granicy faz tworzy się foletowy pierścień.

Próba z tymolem 1cm r-u cukru dod 4krople etanolowego ru tymolu, wymieszac i ostrożnie po ścianach probówki dod 2cm stęż HCl. Podgrzewać w wrzącej łaźni. Czerwona barwa gdy sa cukry.

Próba z antronem 1cm r-u cukru dod po ściance prob 2 cm 0,2% ru antronu w st H2SO4,ostrożnie wymieszać pręcikiem. Podgrzewać we wrzącej łaźni ok5min. Zielona, niebieskie zabarw w obecności cukrow.

REAKCJE SŁUZACE do identyfikacji

Próba Seliwanowa z rezorcyna Odr ald od ket 1cm ru cukru dod 2cm ok. 18% HCl, 2krople 2%etanolowego ru rezorcyny, Po zmieszaniu umieścić prob w wrzącej łaźni. W obecności ketozy po 30s powstaje barwa czerwona. Oprócz fruktozy dodatni odczyn daja sacharoza i inulina czyli cukry złożone, w których jest czas fruktozy. Przedl ogrzewania-również aldoza czerwona.

Próba Tollensa z floroglucyna Odr pent od heks 1cm ru cukru dod 4ktople 2% floroglucyny w 96%etanolu, 1-2cm st HCl. Ogrzewać we wrzącej łaźni ok. 30s. w obecności pentoz powstaje rożowy produkt kondensacji. Heksozy daja zabarw zołta lub brazaowa.

Próba Biala z orcyna Odr pentoz od heksoz 2cm 0,2% ru orcyny w 20% ru HCl dodac krople 1% ru FeCl3, 1cm cukru. Wrzaca łaźnia kilka min. Zielony produkt kondensacji w obecności pentoz.

Próba z odczynnikiem Schaffa identyf wolnej gr aldehydowej 4prob odmierzyc po 1cm odczynnika S, do 1dodac kilka kropli 1%ru aldehydu mrówkowego, do 2 0,5/5ru glukozy, do3 0,5% rru fruktozy. Probówki z glukoza i mannoza lekko ogrzewac, obs zmiany. Oziębić i znowu obs zmiane. Reakcja zachodzi w środowisku zasadowym w podgrzanej temp.

ODROZNIENIE cukrow redukujących

Próba Fehlinga z alkalicznym roztworem soli miedzi 1cm cukru dod 1cm plynu FI i FII. Po wymieszaniu ogrzewać kilka min we wrzącej łw. W obec cuk reduk na ścianach prob pojawia się czerwony osad.

Próba Tollensa z AgNO3 1cm ru AgNO3 dod 2-3kr 10%NaOH i kilka kr 10%ru amoniaku(do rozp osadu) dod 2-3kr cukru i ogrzewać łw. Cukr red pojawia się metaliczne srebro.

Badanie inwersji sach kolba stożkowa na 100cm odmierzyc 75cm 1%ru sacharozy i wstawic na 5min do łw o temp 60%, dod 0,15cm 5M HCl wymieszac i pobrac 5cm do probowki gdzie jest potrzebna do zobojętnienia ilość 0,5M NaOH zas Kolbe z płynem umieścic w łw. Nastepne probki pobierac co 5min do probowek z ustalona ilością NaOH. 4próby, dod 5cm odczynnika Benedicta i wstawic do włw 5min.zapisac ilość i zabarwienie osadu w probkach. W Środowisku alkalicznym powstaje otwarcie pierścienia.

Wykrywanie wit w tl

Wit A do 5kr tranu w parowniczce porcelanowej dod 0,5ml chloroformu i 2ml nasyconego ru SbCl3 w chloroformie. W obecn Wit A powstaje niebeiskie zabarwienie

Wykt steroidów Wit D i cholesterolu 2pr dod 2kr roznych tl. Dod 1ml chloroformu i wtymieszac. Do każdej prob dod po 0,5ml bezwodnika kw octowego i ostrożnie po sciankach probowek po 2kr stez ru H2SO4. tworza się prod reakcji o barwie rozowej przechodzącej przez fioletowa i niebieska w zielona.

Ozn Wit E w tl ros i zw w prob po 100mg tranu, oleju rosl, 300mg margaryny i 500mg masla. Dod 20cm ru DPPH w przypadku tranu i oleju, 15cm DPPH w przypadku margaryny masl. Do Pr z masl dod szczypte bezwodnego siarczanu Mg. Wszystk prob zamknąć korkiem i wytrząsać do uzyskania zawiesiny. Odstawic na 30min w ciemne miejsce. Zawartość prob wymieszac i saczyc przez podwojny twardy saczek. Zmierzyc absorbancje przy 529nm wzg wody. Z krzywej kalibracyjnej odczytac stez tokoferolu.

Izolacja lecytyny i cholesterolu z zoltka jaja kurz zoltk oddz od bial i zalac mieszanina chloroform-etanol 2:1. mieszac na mieszadle magnetyce przez 10min. Otrzymana mieszanine przesączyć do suchej kolby przez karbowany saczek z bibuly miękkiej zwilżony etanolem. Przesacz przenieść do parowniczki i odparowac czesciowo ogrzewając na wlw. Chloroformowy ru wkroplic mieszając do 30ml acetonu/. Wytraca się osad fosfolipidow, który po przesaczeniu i przemuciu osadu 5cm acetonu sluzy do wykonania oznaczenia jakościowych, charakterystycznych dla poszczególnych składników lecytyny.

Reakcja a obecnossc glicerolu proba akroleinowa osad lecytyny zadac w probowce 1cm 96% etanolu i dokladnie rozp. Dodac ok. 0,2g bezwodnego KHSO4 lub CuSO4 i ogrzewac do momentu wydz się par akroleiny o chartka zapachu.

Reakcja na obecność wyższych kw tl(tworzenie mydel) osad lecytyny zadac w probce 3cm 5% etanolowego ru NaOH i ogrzewac wlw przez kilk min. Dod ok. 10ml H2O, rozp mydlo, intensywnie wstrząsać probowka by obserwowac pienienie się ru.

R na obecność fosforanu osad l rozp w prob w 1cm 96% etanolu, dod 2cm 20% NaOH i ogrzewac wlw około 10min. Zobojętnić wobec fenoloftaleiny 5% HCl i przeasaczyc. 2cm przesączu dod 0,5cm odczyn molibdenowego i 0,5cm reduktora metolowego. Prob ogrzac ponownie. W obecności jonow ortofosforowych powstaje kompleks fosforo molibdenowy o barweie żółtej który po dod reduktora redukuje się do blekitu molibdenowego

R na obecność choliny osad ogrzewac z 5cm 20% NaOH w probowce umieszczonej wlw. Wydzs ie powstala w wyniku rozkładu choliny trimetyloamona o chartka zapachu sledzi

Wykr obecności cholesterolu probowka 2cm ru cholesterolu. Dod kr st H2SO4. obserw pojawienie się czerwono purpurowego lub niebieskiego zabarwienia.

Reakcja ninhydrynowa: - r. polega na dekarboksylacji i oksydacyjnej deaminacji aminokwasow w obecności ninhydryny która redukuje się do hydrindantyny. Z aminokwasu powstaje aldehyd uboszy o 1 wegiel CO2 i NH3. Hydrindantyna łączy się z amoniakiem i drugą cząsteczka ninhydryny tworząc purpure ruhemanna - k. niebieskofioletowy.

Reakcja Ksantoproteinowa - ogrzewanie amin. Aromat. (TYR, TRP, PHE) w stężonym kwasem azotowym powstaje żółty produkt, w środowisku alkaicznym powstaje intensywniejszy pomarańczowy.

Reakcja Adamkiewicza-Hopkinsa - wykrywanie układu indolowego tryptofanu. R. polega na kondensacji związkow z ugrupowaniem indolowym z aldehydami lub k. glioksalowym w środowisku stęż. K. organicznych Fioletowe zabawienie mamy

Reakcja grupy triodowej cystyny i cysteiny Podczas ogrzewania w obecnossci stez. NaOH grupy tiolowe ulegaja podstawieniu grupami hydroksylowymi wydziela się H2S który w reakcji z Pb(OH)2 tworzy nierozpuszczalny czarny osad PbS

Reakcja Pauliego - wykrywanie pierscienia imidazolowego histydyny. W środowisku zas. Nastepuje sprzeganie z jonem p-sulfobenodiazonion w wyniku czego powstaje barwnik kol. Pomarańczowego. Sól diazoniowa powstaje w wyniku reakcji k. sulfanilowego oraz NaNO2

Reakcja Biuretowa - W środowisku zasadowym wiaz. Peptydowe ulegaja tautomeryzacji z utworzeniem form enolowych. Z formami enolowymi jony Cu2 tworza kompleksy w których powstaja 2 wiazania z AT. O2 i 4 wiazania koordynacyjne z AT Azotu. Fioletowa barwa

WYKRYWANIE GLICEROLU PRÓBA AKROLEINOWA akroleina powstaje w wyniku odwodnienia glicerolu w wysokiej temp. W obecności czynnika odciągającego wodę. Reakcja daje pozytywny wynik dla lipidów prostych i złożonych z glicerolem. REAKCJA Z Cu(OH)2 ze względu na obecność gr hydroksylowych glicerol łączy się z cuoh2 tworząc kompleks intensywnie niebieski

WYKRYWANIE CHOLINY cholina jest składnikiem lecytyny w celu uwolnienia choliny z cząsteczki lecytyny przeprowadza się zasadową hydrolizę wiązań estrowych. HO-CH2-CH2-N(CH3)3 trimetyloetanoloamina

OBECNOSC WYSZYCH KWASÓW TŁUSZCZOWYCH - zasadowa hydroliza lecytyny prowadzi do uwolnienia wyższych kwasów tłuszczowych i powstania ich soli czyli mydeł

Reakcje na obecność Fosforanu. Jony ortofosforanowe uwolnione z fosfolipidow tworzą z molibdenianem amonu (w obecności H2SO4) żółty kompleks fosforowo molibdenowy. Puzniej w błękit.

WYKRYWANIE DEOKSY - reakcja dischego - furfural powstajacy z deoksyrybozy w kwasnym srodowisku tworzy niebieski kompleks z difenyloamina. Reakcja jest ujemna dla RNA

WYKRYWANIE RESZTY FOSFOROWEJ - jony ortofosforowe uwalniają sie z kw nukleinowych w wyniku hydrolizy wiązań estrowych

---