3

Materiały i sprzęt:

(1)    płytka do chromatografii TLC (płytka aluminiowa pokryta żelem krzemionkowym)

(2)    linijka i ołówek

(3)    czarne falmastry

(4)    komora chromatograficzna

(5)    eluent (1-butanol-kwas octowy-woda, v/v = 4:1:1)

Wykonanie:

1.    Przygotowanie płytki

Na płytce do chromatografii cienkowarstwowej należy zaznaczyć delikatnie ołówkiem linię startu (ok. 10 mm od dolnej krawędzi płytki), starając się nie uszkodzić powirzchni żelu. Na linii startu zaznacza się punkty flamastrami w odstępie ok. 10 mm.

2.    Rozwinięcie chromatogramu

(patrz Chromatografia cienkowarstwowa aminokwasów)

III. Analiza HPLC zawartości kwasu salicylowego w materiale roślinnym

Celem ćwiczenia jest analiza zawartości kwasu salicylowego w liściach dwu odmian tytoniu szlachetnego (Nicotiana tobaccum L.), Bel B - ozonotolerancyjnej i Bel W3 - wrażliwej na ozon poddanych dwutygodniowej ekspozycji na działanie ozonu troposferycznego w warunkach naturalnych na terenie Poznania. Dodatkowo celem analizy jest określenie różnic między detekcją fluorymetryczną a absorpcjometryczną w analizie chromatograficznej.

Kwas salicylowy pełni u roślin funkcję regulatora wielu procesów metabolicznych, w tym reakcji na bodziec stresowy, jak również przenośnika / transduktora wiadomości o stresie w ujęciu lokalnym i systemicznym. W ostatnich latach, wykazano ścisłą zależność między nasileniem bodźca, a akumulacją kwasu salicylowego w organach roślin w warunkach kontrolowanych, co z kolei umożliwia oszacowanie ogólnego efektu stresowego wywoływanego przez środowisko u zasiedlających je roślin.

Po przeprowadzonej ekstrakcji z materiału roślinnego, kwas salicylowy w formie wolnej oznacza się metodą wysokosprawnej chromatografii cieczowej z wykorzystaniem detekcji fluorymetrycznej.

Ryc. 1. Krzywa wzorcowa kwasu salicylowego

3