CCF20110418000 (3)

Mikrobiologia farmaceutyczna ćwiczenie 111 07/08.04.11

1.    Odczyt badania czystości mikrobiologicznej tabletek doustnych - placebo i w razie potrzeby stosowna diagnostyka w kierunku E. coli. Kryteria akceptacji dla tego preparatu są następujące:

ogólna liczba drobnoustrojów tlenowych 10³/gram ogólna liczba pleśni i drożdży 10'/gram Nieobecność w 1 gramie Escherichia coli

Do dyspozycji macie Państwo próbę na oksydazę cytochromową, możliwość przeprowadzenia barwienia Grama, szereg prób biochemicznych dobranych pod kątem identyfikacji Escherichia coli

2.    Odczyt badania jałowości - dzień 7

3.    Test LAL

Państwo będziecie przeprowadzać ten test graniczną metodą żelową (metoda A) wg FP VIII supl. 2010 (2.6.14)

Wszystkie materiały i odczynniki do ladania są apirogenne. Fest należy wykonywać w rękawiczkach. W lodówce na Sali ćwiczeniowej pod tablicą znajdują się statywy z odczynnikami w probówkach (jeden statyw na grupę):

1.    „W”-woda LAL

2.    ,.L" - lizał amebocytów skrzypłocza o czułości (A,) 0.03 IU/ml

Na stole demonstracyjnym znajduje się preparat do oznaczania endotoksyn (sól fizjologiczna do wstrzykiwań) i endotoksyna w stężeniu 2 A Wykonanie testu:

Należy przygotować szereg 3 odpowiednio podpisanych apirogennych probówek:

1.    z 0.1 ml wody LAL (kontrola ujemna)

2.    z 0.1 ml endotoksyny 2 A (kontrola dodatnia)

3.    z 0.1 ml próby badanej Następnie:

® do każdej probówki dodać 0.1 ml lizatu @ bardzo delikatnie zmieszać (ruchem falującym)

® wstawić do inkubacji (duża cieplarka 60± 2 minuty)

© Po inkubacji wyjąć probówki z inkubatora i obrócić ostrożnie o 180°

® Powstanie spoistego żelu przylegającego do dna probówki po jej odwróceniu oznacza wynik dodatni

UWAGA l Warunkiem uzyskania dobrego wyniku testu, jest inkubacja probówek w statywie bez poruszania nimi przez cały czas inkubacji. Wstawiając próby swojej grupy należy uważać żeby nie poruszać statywami innych grup!!! Po wstawieniu wszystkich prób do inkubacji nie należy wchodzić do cieplarki. Próby z cieplarki wyjmuje asystent danej grupy. Powstający że! jest bardzo nietrwały i tylko raz można próbę obrócić o 180°, później żel upłynnia się - dlatego odczyt należy przeprowadzać całą grupą