CCF20121201000

Ćwiczenie 10<

Temat: Wykrywanie hemoglobiny i jej pochodnych. Identyfikacja produktów rozpadu hemu. Ilościowe oznaczanie hemoglobiny we krwi metodą kolorymetryczną Drabkina.

Hemoglobina

Warunkiem wiązania tlenu przez hemoglobinę .białka należącego d ogrupy hemoprotein jest obecność jednostki niebiałkowej, a mianowicie grupy hemowej.^; Składa się ona z części organicznej i atomu żelaza. Część organiczna protoporflryna, zbudowana jest z czterech pierścieni pirolowych, połączonych mostkami • metinowymi. w pierścień tetrapirolowy. Do tego pierścienia przyłączone są łańcuchy boczne, z których cztery są grupami metylowymi, dwa- grupami winylowymi i dwa - resztami kwasu propionowego

Atom żelaza w grupie hemowej, umieszczony w centrum pierścienia protoporfiryny, wiąże się z czterema atomami azotu wiązaniami koordynacyjnymi, piąte wiązanie — z tlenem (zachodzi proces utlenowania), a szóste wiązanie koordynacyjne służy do połączenia z białkiem przez pierścień imidazolowy histydyny.

W procesie utlenowania stopień utlenienia żelaza nie zmienia się, powstaje oksyhemoglobina (Hb-0₂). W przypadku utleniania żelazo zmienia swój stopień utlenienie z Fe⁺² do Fe⁺³ z jednoczesnym przyłączeniem cząsteczki H₂0, powstaje methemoglobina (Met-IIb).

Hemoglobina jest przenośnikiem tlenu w organiźmie w postaci oksyhemoglobiny tj. hemoglobiny utlenowanej. Cząsteczka hemoglobiny może przyłączyć 4 cząsteczki tlenu atmosferycznego, lg hemoglobiny wiąże 1,36 ml tlenu. Proces utlenowania hemoglobiny i trwałość powstałej oksyhemoglobiny zależy od Ciśnienia parcjalnego tlenu, tzn. od jego stężenia.

Oksyhemoglobina pod działaniem kwasów, zasad i rozpuszczalników organicznych, jak etanol lub aceton, przechodzi w parahematynę, inaczej nazywaną hemichromogenem. Część białkową jest tu denaturowana, a żelazo - w postaci Fe⁺³. Redukując hemichromogen otrzymuje się hemochromogen, zbudowany z hemu i globiny zdenaturowanej.