CCF20150918003 (3)

METODY STOSOWANE PODCZAS WYKONYWANIA PREPARATÓW MIKROSKOPOWYCH:

1. Barwienie przyżyciowe

Przeprowadza się na żywych tkankach (roślinnych lub zwierzęcych) bez utrwalania.

• cienki skrawek umieszcza się w rozcieńczonym barwniku na kilka - kilkanaście minut

■ nadmiar barwnika usuwa się poprzez płukanie w wodzie destylowanej

■ tkankę obserwuje się w kropli wody lub barwnika

2. Preparaty rozgniatane (rozmazowe)

Służą do barwienia chromosomów (DNA).

* materiał należy szybko utrwalić (płyn Carnoya)

* maceracja (rozmiękczenie) tkanki w 1M HCI w temp 60°C

■ przemycie w wodzie destylowanej

■ barwienie barwnikem Schiffa 30 - 60’ (lub kilka godzin w metodzie Feulgena)

■ przemycie w wodzie destylowanej

■ potraktowanie mieszaniną wybielającą 10'

■ płukanie w wodzie bieżącej 30’

* wykonanie rozmazu w kropli 45% kwasu octowego

Chromatyna i jądra barwią się na kolor fioletowo - czerwony; cytoplazma jest bezbarwna. INNE METODY BARWIENIA PREPARATÓW ROZMAZOWYCH:

Kanim wytaanma chromosomy i chromafyhę na kolor ciemnoczerwony

Metoda orceina - kwas octowy

Orceina wybarwia chromosomy na ciemnogranatowy do czarnego

Barwienie nigrozyną

Chromosomy i chromatyna barwią się na kolor czarny

3. Metoda parafinowa

Jest pracochłonna, ale pozwala na wykonanie b. cienkich skrawków (do 2p grubości), co pozwala na dokładne zbadanie komórek.

Cały proces przygotowania preparatów obejmuje szereg czynności:

• utrwalenie materiału

• odwodnienie - szereg alkoholi o wzrastającym stężeniu (od 50% do absolutnegoO

• wysycenie tkanek parafiną i zatopienie wycinków w bloczkach

• pocięcie skrawków na mikrotomie i przytępienie ich do szkiełek podstawowych

• odparafinowanie (w rozpuszczalnikach organicznych - ksylen, benzen, toluen)

• uwodnienie

• barwienie

• odwodnienie

• dwie zmiany ksylenu

• zamykanie w balsamie kanadyjskim

Cały proces trwa około 2 tygodni, jednakże uzyskane preparaty parafinowe są trwałe przez kilkanaście lat.

Przygotowanie szkiełek: