cw2 4

limfy z kraba Limulus polyphemus (LAL) przez endotoksynę bakteryjną powoduje żelowanie (krzepnięcie) limfy.

2*1 W oznaczeniu chromogennym-kolorymetrycznym koagulogen obecny w LAL połączony jest z bezbarwnym syntetycznym substratem chromoforem p-nitroaniliną i może być aktywowany przez koagulazę. Endotoksyna bakterii G- katalizuje aktywacją proenzymu obecnego w LAL. Aktywny enzym koagulaza katalizuje odłączenie p-nitroaniliny (pNA) od substratu, Uwolniona pNA, wywołuje żółte zabarwienie roztworu, którego intensywność mierzy się spektrofotometrycznie przy długości fali X = 405 nm. Szybkość aktywacji tego procesu jest zależna od stężenia endotoksyny. Czas pojawienia się koloru jest odwrotnie proporcjonalny do ilości endotoksyny w próbie. Kinetyczne oznaczanie LAL jest bardzo czułe i posiada szeroki zakres pomiarowy (od 0,01 (ĘU)/ml do 5B((Ul§))'ml).

A*/ odczyt pr|y, pomocy ^lorymetru z systemem optycznego pomiaru gęstości (jako tubę readggl,?; _:

B*/ z zastosowaniem czytnika mikropłytkowego, który posiada: A) system ciągłego optycznego pomiaru gęstości lub pomiaru absorbancji, B) mikroprocesor i oprogramowanie zdolne do przeprowadzenia analizy danych z zastosowaniem regresji liniowej i wielomianowej.

Wykonanie oznaczenia:

Główne odczynniki:

Odczynnik LAL: zliofilizowany odczynnik ENDOSAFE® ENDOCHROME-K™ LAL zawiera syntetyczny substrat chromogenny oraz zbuforowany lizat amebocytów skrzypłocza stabilizowany przez jedno i dwuwartościowe kationy,

Standard kontrolny endotoksyny (CSE) - standard, który jest zbliżony do RSE (referencyjnego standardu endotoksyny),

Referencyjny standard endotoksyny fRSEU oczyszczony LPS z Escherichia coli, który służy jako międzynarodowy standard referencyjny,

Roztwór wolny od endotoksyby - woda lub roztwór o zawartości <0,2 EU/ml.