8

8



FARMAKOPEA POLSKA WYD. VII TOM I


2.6.14. ENDOTOKSYNY BAKTERYJNE

Przed użyciem, ogrzewać podłoże 5 min w łaźni wodnej i ochłodzić. Do każdej probówki dodać 0,5 ml roztworu pi-rosiarczynu sodu OD (12 g/1) i 0,5 ml roztworu cytrynianu żelaza(III)-amonowego (10 g/1). Oba roztwory powinny być przygotowane bezpośrednio przed użyciem i przesączone przez sączek membranowy (wielkość porów: 0,45 pm).

Agarowe podłoże S (R2A)

Wyciąg drożdżowy    0,5    g

Pepton proteose    0,5    g

Hydrolizat kazeiny    0,5    g

Glukoza    0,5    g

Skrobia    0,5    g

Dipotasu wodorofosforan    0,3    g

Magnezu siarczan bezwodny    0,024    g

Sodu pirogronian    0,3    g

Agar    15,0    g

Woda oczyszczona    1000 ml

Doprowadzić pH, aby po sterylizacji wynosiło 7,2 ± 0,2. Wyjaławiać 15 min w sterylizatorze parowym w temp. 121°C.

CZYNNIKI NEUTRALIZUJĄCE

Czynniki neutralizujące mogą być stosowane do neutralizacji aktywności przeciwdrobnoustrojowej. Neutralizatory mogą być dodawane, najlepiej przed sterylizacją do zbuforowanego roztworu chlorku sodu z peptonem o pH 7,0. Jeżeli są stosowane, należy wykazać ich skuteczność neutralizacji oraz brak działania toksycznego w stosunku do drobnoustrojów.

Typowy roztwór neutralizujący ma następujący skład:

Polisorbat 80    30    g

Lecytyna (z jaja)    3g

Histydyny chlorowodorek    1    g

Pepton (mięsny lub kazeinowy) ’    lg

Sodu chlorek    4,3    g

Potasu diwodorofosforan    3,6    g

Disodu wodorofosforan dwuwodny    7,2    g

Woda oczyszczona    1000 ml

■Wyjaławiać 15 min w sterylizatorze parowym w temp. 121°C.

Jeżeli roztwór wykazuje niedostateczne właściwości neutralizujące, można zwiększyć stężenie polisorbatu 80 lub lecytyny.

Zamiennie, można stosować neutralizatory zamieszczone w tabeli 2.6.13.-3.

01/2005:20614

2.6.14. ENDOTOKSYNY BAKTERYJNE

Badanie obecności endotoksyn bakteryjnych (test LAL) jest wykonywane w celu wykrycia lub oznaczenia zawartości endotoksyn bakterii Gram-ujemnych, z zastosowaniem lizatu amebocytów skrzypłocza (Limulus polyphemus lub Tachypleus tridentatus). Wyróżnia się trzy techniki badania: żelową polegającą na utworzeniu żelu; zmętnieniową (turbidymetryczną), polegającą na wywołaniu zmętnienia w wyniku rozszczepienia endogennego substratu oraz chromogenną polegającą na powstaniu zabarwienia w wyniku enzymatycznego rozszczepienia syntetycznego kompleksu peptyd-chromogen.

W rozdziale opisano 6 następujących metod:

Metoda A. Metoda żelowa: badanie graniczne

Metoda B. Metoda żelowa: badanie półilościowe

Metoda C. Zmętnieniową (turbidymetryczną) metoda kinetyczna

Metoda D. Chromogenną metoda kinetyczna

Metoda E. Chromogenną metoda pomiaru punktu końcowego

Metoda F. Zmętnieniową metoda pomiaru punktu końcowego

Oznaczenia można przeprowadzać każdą z wyżej wymienionych 6 metod. Jeżeli wyniki otrzymane po wykonaniu badań jedną z tych metod są wątpliwe lub sporne, to znaczenie rozstrzygające mają wyniki uzyskane metodą A, jeżeli nie podano inaczej w monografii.

Badania wykonywać w warunkach zabezpieczających próbki i sprzęt przed zanieczyszczeniem endotoksynami.

Aparatura

Pozbawić endotoksyn szkło i inny sprzęt odporny na ogrzewanie przez umieszczenie w suszarce używając zwalidowa-nego procesu. Powszechnie stosowany jest czas co najmniej 30 min i temp. 250°C. Jeżeli używana jest aparatura z tworzywa sztucznego, np. płytki mikrotitracyjne czy końcówki do pipet automatycznych, to musi ona być sprawdzona na nieobecność endotoksyn i czynników zakłócających test, tzw. czynników interferujących.

UWAGA: W monografii termin „probówki" odnosi się do wszystkich naczyń używanych w badaniu, np. dołków płytek mikrotitracyjnych.

Przygotowanie roztworu podstawowego endotoksyny wzorcowej

Roztwór podstawowy endotoksyny wzorcowej jest sporządzany z porównawczej endotoksyny wzorcowej mianowanej wobec Międzynarodowego Wzorca, np. endotoksyny wzorcowej BPP.

Tabela 2.6.13.-3. Substancje neutralizujące czynniki przeciwdrobnoustrojowe dodawane do zbuforowanego roztworu

chlorku sodu z peptonem o pH 7,0

Rodzaj czynnika przeciwdrobnoustrojowego

Substancja neutralizująca

Stężenie

Uwagi

Związki fenolowe

Sodu laurylosiarczan Polisorbat 80 i lecytyna Żółtko jaja

4 g/1

30 g/1 i 3 g/1 5 ml/1 - 50 ml/1

Dodać do jałowego zbuforowanego roztworu chlorku sodu z peptonem o pH 7,0

Organiczne związki rtęci

Sodu tioglikolan

0,5 g/1 - 5 g/1

Związki halogenowe

Sodu tiosiarczan

5 g/1

Czwartorzędowe związki amoniowe

Żółtko jaja

5 ml/1 - 50 ml/1

Dodać do jałowego zbuforowanego roztworu chlorku sodu z peptonem o pH 7,0


Wskazówki ogólne” (1) odnoszą się do wszystkich monografii i innych tekstów


261



Wyszukiwarka

Podobne podstrony:
2.6.14. ENDOTOKSYNY BAKTERYJNE FARMAKOPEA POLSKA WYD. VII TOM I Moc endotoksyny jest wyrażana w Jedn
2.6.7. MYKOPLAZMY farmakopea POLSKA WYD. VII TOM I Tabela 2.6.1.-3. Minimalna liczba pojemników
2.6.1. JAŁOWOŚĆ FARMAKOPEA POLSKA WYD. VII TOM I Tabela 2.6.1.-1. Testowe szczepy drobnoustrojów
FARMAKOPEA POLSKA WYD. VII TOM I 2.6.9. NADMIERNA TOKSYCZNOŚĆ FARMAKOPEA POLSKA WYD. VII TOM I 2.6.9
2.6.1. JAŁOWOŚĆ FARMAKOPEA POLSKA WYD. VII TOM I wymagania badania jałowości, o ile wyraźnie nie
2.6.1. JAŁOWOŚĆ FARMAKOPEA POLSKA WYD. VII TOM I obojętny roztwór peptonu mięsnego lub kazeinowego (
2.6.7. MYKOPLAZMY FARMAKOPEA POLSKA WYD. VH TOM I Podłoże stałe Roztwór Hanks’a zrównoważony
Obraz2 MONOGRAFIE SZCZEGÓŁOWE FARMAKOPEA POLSKA WYD. Vm TOM fl 4- Siarczany (2,4.13): nie więcej ni
Obraz5 MONOGRAFIE SZCZEGÓŁOWE FARMAKOPEA POLSKA WYD. VfII TOM III 01/2008:0201 zmieniona
Obraz8 (5) farmakopea POLSKA WYD. VIII TOM UJ WYKAZ DAWEK 1 2 3 4 5 6 7 Ouabainum dożylnie 0,1 m
15 9 WYKAZ DAWEK FARMAKOPEA POLSKA WYD. VIII TOM UlWYKAZ DAWEK SUBSTANCJI CZYNNYCHDawki zwykle stoso
Egzamin probny pisemny0 04 2011 str 7 MC NOCIURP.SZ£7,ltGÓI.OWE FARMAKOPEA POLSKA WYD. VIII TOM II
Obraz3 MONOGRAFIE SZCZEGÓŁOWE FARMAKOPEA POLSKA WYD. VIII TOM III Czas (min) Faza ruchoma A (% V/
Obraz4 FARMAKOPEA POLSKA WYD. VIII TOM III MONOGRAFIE SZCZEGÓŁOWE Wprowadzenie: 10 pi. Retencja wzg
Obraz5 FARMAKOPEA POLSKA WYD. VIU TOM III WYKAZ
Obraz6 WYKAZ DAWEK FARMAKOPEA POLSKA WYD. VIII TOM IIIWYKAZ DAWEK SUBSTANCJI CZYNNYCHDawki zwykle s
Obraz7 WYKAZ DAWEK FARMAKOPEA POLSKA WYD. VIII TOM

więcej podobnych podstron