6

2.6.7. MYKOPLAZMY

FARMAKOPEA POLSKA WYD. VH TOM I

Podłoże stałe

Roztwór Hanks’a zrównoważony elektrolitami (modyfikowany) (4)    200 ml

Dekstran DEAE    200 mg

Agar jonowy (3)    15,63 mg

Dobrze wymieszać i wyjaławiać w autoklawie. Ochłodzić do temp. 100°C. Dodać do 1740 ml podłoża płynnego jak opisano powyżej.

(1) Wyciąg serc wołowych
Serca wołowe (do przygotowania wyciągu)	500 g
Pepton	10 g
Sodu chlorek	5 g
Woda destylowana do	1000 ml
Wyjaławiać w autoklawie.
(2) Podstawowe witaminy
Biotyna	100 mg
Wapnia pantotenian	100 mg
Choliny chlorek	100 mg
Kwas foliowy	100 mg
i-Inozytol	200 mg
Nikotynamid	100 mg
Pirydoksalu chlorowodorek	100 mg
Ryboflawina	10 mg
Tiaminy chlorowodorek	100 mg
Woda destylowana do	1000 ml
(3) Agar jonowy
Wysoko oczyszczony agar do stosowania w	mikrobiolo-
gii i immunologii przygotowany metodą wymiany jonowej,
w wyniku której otrzymuje się produkt o wyższej czystości,
przejrzystości i sile żelującej.
Produkt zawiera ok.:
Woda	12,2%
Popiół	1,5%
Popiół nierozpuszczalny w kwasach	0,2%
Chlor	0
Fosforany (obliczone jako P205)	0,3%
Azot całkowity	0,3%
Miedź	8pg/g
Żelazo	170 pg/g
Wapń	0,28%
Magnez	0,32%
(4) Roztwór Hanks 'a zrównoważony elektrolitami
(modyfikowany)
Sodu chlorek	6,4 g
Potasu chlorek	0,32 g
Magnezu siarczan siedmiowodny	0,08 g
Magnezu chlorek sześciowodny	0,08 g
Wapnia chlorek bezwodny	0,112 g
Disodu wodorofosforan dwuwodny	0,0596 g
Potasu diwodorofosforan bezwodny	0,048 g
Woda destylowana do	800 ml
(5) Wyciąg sercowo-mózgowy
Wyciąg mózgów cielęcych	200 g
Wyciąg serc wołowych	250 g
Pepton proteose	10 g
Glukoza j ednowodna	2g
Sodu chlorek	5 g
Disodu wodorofosforan bezwodny	2,5 g
Woda destylowana do	iooo ml
(6) Bulion PPLO
Wyciąg serc wołowych	50 g

Pepton    10 g

Sodu chlorek    5 g

Woda destylowana do    1000 ml.

01/2005:20608

2.6.8. PIROGENY

Badanie polega na pomiarach przyrostów temperatury ciała królików po dożylnym wstrzyknięciu jałowego roztworu substancji badanej.

Selekcja zwierząt. Użyć zdrowych, dojrzałych płciowo królików, dowolnej płci, o masie ciała nie mniejszej niż 1,5 kg, otrzymujących pełnowartościową karmę, niezawierającą antybiotyków i niewykazujących zmniejszenia masy ciała w czasie tygodnia poprzedzającego badanie. Nie należy używać do badań królika, który:

a)    w czasie 3 ostatnich dni brał udział w badaniu, które dało wynik ujemny albo

b)    w czasie 3 ostatnich tygodni brał udział w badaniu, które dało wynik dodatni tzn, że badana substancja nie spełnia wymagań.

Pomieszczenia dla zwierząt. Utrzymywać króliki w klatkach pojedynczo, w pomieszczeniach zapewniających spokój i odpowiednią, stałą temperaturę. Zwierzęta nie mogą mieć dostępu do karmy w nocy, która poprzedza badanie oraz do czasu zakończenia badania; podczas badania nie podawać wody. Badanie wykonywać w cichym pomieszczeniu, zapewniającym ochronę zwierząt przed bodźcami, które mogłyby spowodować stan pobudzenia; temperatura pomieszczenia nie różni się więcej niż o ± 3°C od temperatury panującej w pomieszczeniu, w którym króliki stale przebywają lub w którym przebywały w czasie co najmniej 18 h przed badaniem.

Materiały. Szkło laboratoryjne, strzykawki i igły. Materiały te dokładnie umyć wodą do wstrzykiwań i ogrzewać w suszarce 30 min w temp. 250°C lub 1 h w temp. 200°C.

Klatki pomiarowe. Klatki pomiarowe dla królików, u których pomiary temperatury ciała dokonywane są za pomocą urządzeń elektrycznych, są skonstruowane tak, aby zwierzę było unieruchomione tylko za pomocą luźnego kołnierza umożliwiającego stosunkowo swobodne poruszanie ciała i pozwalającego na normalną pozycję siedzącą. Unieruchamia się zwierzęta przez związanie lub w podobny sposób, który nie mógłby wyrządzić im krzywdy. Króliki są umieszczane w klatkach pomiarowych nie krócej niż 1 h przed pierwszym pomiarem temperatury i pozostają w nich przez cały okres badania.

Termometry, Użyć termometr lub urządzenie elektryczne wskazujące temperaturę z dokładnością ± 0,1°C i umieścić w odbytnicy królika na głębokości ok. 5 cm. Głębokość jest stała dla każdego królika w każdym pomiarze. Czujnik urządzenia elektrycznego może pozostawać w tym samym położeniu przez cały czas trwania badania,

Badanie wstępne, Po przeprowadzeniu selekcji, zwierzętom, które nie były używane do badań w czasie 2 tygodni przed podaniem produktu badanego, należy na jeden do trzech dni przed podaniem produktu wstrzyknąć dożylnie 10 ml na kilogram masy ciała apirogennego roztworu chlorku sodu OD (9 g/1) ogrzanego do temperatury ok. 38,5°C. Zarejestrować temperaturę ciała zwierząt zaczynąjąc pomiary co najmniej

250

Patrz trzecia strona okładki: część informacyjna dotycząca monografii ogólnych