DSC00779

Ćwiczenie 3

Oznaczenie aktywności dehydrogenaz

Oznaczenia aktywności dehydrogenaz (EC 1.1) studenci wykonują w materiale glebowym z doświadczenia dwuczynnikowego. które sami założyli na ćwiczeniu nr 2.

Zasada metody polega na pomiarze objętości wodoru niezbędnego do redukcji chlorku 13,5-trifcnylotetrazoliowego (TTC) do trifenyloformazanu (TFF) w myśl reakcji:

Ci«Hi$C1N₄ + 2H -► C„H,6N4 + HCI

Im większa aktywność dehydrogenaz tym więcej wytworzy się TFF. Związek len można wyekstrahować z gleby metanolem lub etanolem i jego ekstynkcję zmierzyć na spektrofotometrze.

Procedura wykonania oznaczeń

1.    Umieścić 6 g gleby w probówce ze szlifem o pojemności 23 cm¹.

2.    Umieścić w probówce z materiałem glebowym 60 mg CaCOj.

3.    Kolejno dodać:

•    1 cm^J 3% chlorku trifenylotetrazoliowego.

•    2,5 cm'* wody destylowanej.

4.    Dokładnie wymieszać zawartość probówki za pomocą szklanej bagietki.

5.    Zamknąć probówkę korkiem i wstawić do termostatu na 24 h (temp.

37°G).

6.    Po 24 h wyjąć kolbkę z termostatu.

7.    Przygotować zestaw do sączenia (kolbka miarowa o pojemności 50 cm³, lejek szklany, twardy sączek).

8.    Bezpośrednio przed sączeniem probówkę z materiałem glebowym uzupełnić do 25 cm³ alkoholem etylowym.

9.    Wymieszać zawartość probówki przez kilka sekund i pozostawić na kilka minut w celu opadnięcia gleby na dno.

10.    Roztwór z nad gleby przenieść na twardy sączek (zestaw do sączenia).

11.    Probówkę ponownie uzupełnić do 25 cm³ alkoholem etylowym.

12.    Wymieszać zawartość probówki przez kilka sekund i pozostawić na kilka minut w celu opadnięcia gleby na dno.

13.    Roztwór z nad gleby przenieść na twardy sączek (zestaw do sączenia).

14.    Kolbki uzupełnić do 30 cm³ alkoholem etylowym.

15.    Zawartość kolbek dokładnie wymieszać.

11