DSC00784

»

Ćwiczenie 5

Oznaczenie aktywności kosf at azt kw a*kkj

y ‘

O/n.n /cnia aktywności fosfatazy kwaśne) IBC 3.1 3.2; nadcau wykonu    i.

w iiiaicriulc glebowym z doświadczenia dwaciyMftoatgo. kadrę tam ułożyli na ćwiczeniu nr 2. Fosfataza kwaśna to anaoMoMnu. kadra *—^ł*~yr    5.

hydrolizę inonocsirów kwasu fosforowego wedhtg    mIhmk    ^

R-OPOiH: + H_:0 -w ROM ♦ H.PO.

ZuMidn metody polega na oznaczeniu 4-nMrofewlB IfW) powstikf# z hydrolizy 4-nitrofenylofosforanu diaodowego (PNPNa) Ojnymałnt pH Ra fosfatazy kwaśnej wynosi od 3,4 do 6.2. W łmkamka kwnśoysn 4-mt/ofenol    ^

przechodzi w żółto zabarwiony anion.

9

Procedura wykonania oznaczeń Próbka badana

1.    Umieścić 1 g gleby w kolbie stożkowej o pojemności 100 cm

2.    Kolejno dodać:

•    4 cm buforu o pH 6.5;

0,25 cm³ toluenu;

•    I cm³ roztworu 4-nitrofenylofosforami Anodowego < PNPNa).

3.    Wymieszać zawartość kolbki przez kilka sekund

4.    Zamknąć kolbkę korkiem i wstawić do lermoaaau na 60 rnin. (temp 37°C).

£ iiJ ul ul o

5.    Po 60 min. wyjąć kolbkę z termostatu.

6.    Przygotować zestaw do sączenia (kolbka miarowi o poyr wnści 50 cm. lejek szklany, twardy sączek).

7.    Bezpośrednio przed sączeniem do gleby dodać kolejno:

•    I cm' roztworu 0,5 M CaClv2HjO,

•    4 cm' roztworu 0,5 M NaOH.

8.    Przenieść ilościowo zawartość inkubowanej fcofbkt na sączek (zestaw do    U

sączenia).

9.    Kilka razy kolbkę i sączek przemyć destylowaną wodą.

10.    Uzupełnić kolbkę miarową z przesączem (do objętości 50 cnr) wodą destylowaną i wymieszać.

II . Mierzyć ekstynkcję wytworzonego 4-mtroCeoołu (PNP) na spektrofotometrze (410 nm).

12. Wyniki pomiaru podstawić do wzoru (I) i zestawić w tabeli nr i.

18