00

START

I

-guanina

-adenina

— cytozyna

$    -uracyl

-tymina

^020,0    Rys. 10.13. Schemat chromatogramu zasad azoto-

rozpuszczalnika    _Wych rozdzielonych w układzie izopropanol/HCl/

/HjO (65:16.7:18,3)

Liczbę mikromoli zasady w 5 ml eluatu wyliczyć ze wzoru:

a = AA • 5 -d

gdzie: a — liczba pmol zasady w 5 ml. AA = A_tnMX-A_290m0}, d — liczba pmol zasady w 1 ml eluatu, którego absorbancja przy )._mtLX = 1,0 (tab. 10.4).

Skład zasad azotowych wyrazić w procentach molowych sumy zasad (patrz ćw. 10.30).

Tabela 10.4. I.iczbH mikromoli zasad azotowych w I ml 0,1 M roztworu HCł, którego /t_nu, = 1,0

Zasada azotowa	Ilość (łimol)
A	0,0794
G	0.0901
C	0,1000
T	0,1260
U	0,1230

10.2.8. Oznaczanie składu nukleozydowego techniką HPLC

Wysokosprawna chromatografia cieczowa (HPLC) jest to odmiana kolumnowej chromatografii cieczowej, charakteryzująca się wysoką rozdzielczością i powtarzalnością uzyskiwanych rozdziałów, co pozwala na wykonywanie dokładnych ozna-