144

T4 DNA polimeraza w obecności tylko jednego z 4 dNTP ma aktywność 3’-5’ egzonukleazy i usuwa z jednoniciowego DNA nukleotydy których brak w roztworze reakcyjnym.

stop

TAG

TGA

TAA

stop or read through

XXXGGCTCTAACTCTCCTCT ------ CCGAGATTGAGAGGAGA

H

G 1 E G R (or nryy) 5^ł GGTATTGAGGGTCGCATG— 3^T CCATAACTCCCAGCGTAC--

Hill

3*

5*

Po dojściu na nici DNA do nukleotydu takiego samego jak znajdujący się w roztworze reakcyjnym aktywność T4 DNA polimerazy zmienia się z 3’-5’ egzonukleazowej na 5’-3’ polimerazową.

I T4DNApoUdGTPonly

Xa

JLM

I E G R ” (or imy>

GGT ATT GAGGGTCGCATG-

GCGTAC-

LIC Xa Insert

XXXGG

- CCGAGATTGAGAGGAGA

\

i

i

1 E 6 R * (or any) T C CGGT ATTGAGGGT CG C AT G — AGGCCATAACTCCCAGCGTAC —

| Annealing, Iransformation

XXXGGCT CT AACTCTCCT CT! -CCGAGATTGAGAGGAGA