DSC00216

BIOLOGIA KOMÓRKI; 4-8 STYCZNIA 2010 Podstawy ANALIZY BIAŁEK - zagadnienia

ZAGADNIENIE 5 (Indywidualne):

Dopasuj definicje do podanych terminów.

TERMINY:

| FRET

2.    SDS-PAGE

3.    Western błot (immunoblot)

4.    elektroforeza dwukierunkowa

DEFINICJE:

A.    Technika separacji białek, w której mieszaninę białek rozdziela się wpierw w opraciu o ich punkt izoelektryczny a następnie w oparciu o ich masę cząsteczkową

B.    Technika, w której mieszaninę białek rozdziela się na żelu zawierającym detergent, który łączy się z białkami i powoduje rozwinięcie ich struktury lll-rzędowej

C.    Technika monitorowania odległości wględem siebie dwóch fluorescencyjnie wyznakowanych cząsteczek i tym samym ich oddziaływań w komórce

D.    Technika, w której białka są rozdzielane w wyniku elektroforezy, przenoszone na odpowiednie filtry, a następnie analizowane z użyciem przeciwciał

ZAGADNIENIE 6 (indywidualne):

Masz do wyboru cztery różne przeciwciała monoklonalne, każde z nich powinno być specyficzne dla białka Orc1 Xenopus. Orc1 wchodzi w skład kompleksu stanowiącego miejsce rozpoznania inicjacji replikacji DNA (tzw. ORC) u Eukariota. Chesz użyć najlepszego z nich, aby poznać inne białka wchodzące w skład tego kompleksu.

Przeciwciała mają symbole TK1, TK15, TK37 i TK47. Aby zdecydować, które z nich jest najlepsze do Twoich celów, przyczepiasz je kowalencyjnie do kulek sefarozowych, inkubujesz z ekstraktami białkowymi uzyskanymi z Xenopus, odwirowujesz i odpłukujesz, a następnie separujesz od kulek sefarozowych z użyciem detergentu. Uzyskane roztwory czystych białek rozdzielasz na żelu -cztery różne mieszaniny dla każdego z badanych przeciwciał, a żel barwisz następnie błękitem kumazyny. Wynik tego eksperymentu jest przedstawiony obok.

Odpowiedz:

Które prążki na żelu odpowiadają białkom wchodzącym w skład ORC?

Jakie wnioski możesz wyciągnąć odnośnie specyficzności poszczególnych przeciwciał?

Które z przeciwciał będzie najodpowiedniejsze dla Twoich badań?

Jakiej metody teraz użyjesz i z jakich dokłanie będzie sie składała etapów, by wykryć z użyciem wybranych przeciwciał inne białka wchodzące w skład kompleksu ORC?