img100

badań, dobór podłoża itp. Zdolność barwienia metodą Grama wynika m.in. ze składu chemicznego cytoplazmy, a przede wszystkim z budowy ściany komórkowej. Ściana bakterii G(+) jest zbudowana prawie wyłącznie z mu-reiny, natomiast G(-) mają ścianę cieńszą, lecz w swym składzie, oprócz mureiny, zawierają lipopolisacharydy oraz białka i są bardziej odporne na działanie różnych substancji chemicznych. Barwienie metodą Grama należy przeprowadzić na hodowlach 18-24-godzinnych. W starych komórkach zdolność do tworzenia trwałego kompleksu z fioletem się zmniejsza. Niektóre bakterie, których część komórek barwi się na fioletowo, a część na czerwono, noszą nazwę gramozmiennych.

Barwienie przetrwalników metodą Wurtza w modyfikacji Scha-effera-Fultona. Utrwalony preparat barwimy, stosując:

•    zieleń malachitową (5% roztwór wodny) 30-60 s, a następnie podgrzewając trzykrotnie, aż do ukazania się pary;

•    spłukiwanie wodą wodociągową w ciągu 30 s;

•    safraninę (0,5% roztwór wodny);

•    spłukiwanie wodą.

Po wysuszeniu preparatu w powietrzu atmosferycznym obejrzeć go pod mikroskopem. W wyniku barwienia przetrwalniki będą miały kolor zielony, a komórki wegetatywne kolor czerwony.

Wykonanie ćwiczenia

Sporządzanie preparatów i metody barwienia

•    Materiały: hodowle szczepów bakteryjnych: E. coli, Str. faecalis, B. subtilis, Cl. perfringens.

•    Aparatura: mikroskopy świetlne.

•    Szkło: szkiełka przedmiotowe, Lindnera i nakrywkowe.

•    Odczynniki: błękit metylenowy, 10% roztwór nigrozyny, safranina, zieleń malachitowa, fiolet krystaliczny, fuksyna zasadowa, płyn Lugola, alkohol etylowy.

•    Wykonanie:

-    wykonać preparat barwiony metodą prostą, pozytywną Lófflera, używając szczepu E. coli;

-    wykonać preparat barwiony metodą prostą, negatywną, stosując nigro-zynę i szczep bakteryjny Cl. perfringens;

-    wykonać preparaty barwione metodą Grama, używając dwóch szczepów bakteryjnych: E. coli i Str. faecalis;

-    wykonać preparat barwiony metodą Wurtza, stosując szczep B. subtilis;

-    wszystkie wykonane preparaty oglądać pod mikroskopem przy powiększeniu 400 i 1 000 razy;

-    poczynione obserwacje mikroskopowe narysować w zeszycie.

33