7334803284

2.    Barwienie złożone metoda Grama

Szczepy bakteryjne

-    Escherichia coli i Bacillus megalerium

-    Proteus vulgaris i Micrococcus luteus

Roztwory stosowane do barwienia

-    fiolet krystaliczny

-    safranina

-    płyn Lugola

-    95% etanol

a)    Przygotowanie preparatu

-Na szkiełku podstawowym zmieszać hodowle bakterii gramujemnej (np. E. coli) i gramdodatniej (np. Bacillus megaterium).

-    Zrobić rozmaz, wysuszyć i utrwalić jak w punkcie la).

b)    Barwienie metoda Grama

-    Preparat barwić fioletem krystalicznym przez 2 minuty.

-    Zlać fiolet, wypłukać szkiełko płynem Lugola i zalać je płynem Lugola na 2 minuty.

-    Spłukać preparat wodą, osuszyć bibułą i zalać na 30 sekund 95% etanolem.

-    Spłukać wodą, osuszyć bibułą i dobarwiać safraniną przez 5 minut.

-    Spłukać wodą, osuszyć i oglądać.

-    Narysować obraz widziany w mikroskopie, uwzględniając kolor, na jaki wybarwiły się komórki poszczególnych bakterii.

3.    Oglądanie gotowych preparatów:

a)    Otoczki B. megaterium

barwienie negatywno-pozytywne (na tle ciemnego tuszu widać niewybarwione otoczki, a wnętrze komórki wybarwione safraniną na różowo);

b)    Przetrwalniki B. megaterium

barwienie złożone (zieleń malachitowa na gorąco wybarwia endospory na zielono, zaś safranina komórki wegetatywne na różowo).

III. Zagadnienia do opracowania

1.    Podstawowe kształty komórek bakteryjnych i tworzone przez nie układy.

2.    Technika sporządzania preparatów mikroskopowych (cel i sposoby utrwalania preparatów).

3.    Podział metod barwienia: barwienia proste i złożone; pozytywne i negatywne.

4.    Zasada barwienia metodą Grama.

5.    Bakterie gramujemne i gramdodatnie.

10