IMG8

Bezpośrednia metoda mikroskopowa oznaczania komórek somatycznych Zasada wg. Normy Polskiej PN-EN- ISO 13366-1

Wykonanie oznaczenia

Z każdej próbki wykonać co najmniej 2 rozmazy i policzyć komórki

Szkiełka podstawowe odtłuścić, wytrzeć papierem nie pozostawiającym pyłu, opalić i

schłodzić

Przygotowanie rozmazu

Z przygotowanej do badania próbki pobrać mikrostrzykawką 0,01 ml mleka. Dokładnie oczyścić zewnętrzną powierzchnię strzykawki, która weszła w kontakt z próbką. Odmierzoną objętość umieścić na oczyszczonym szkiełku podstawowym z oznaczoną powierzchnią o wymiarach 20X5mm. Następnie rozprowadzić badaną objętość próbki możliwie jak najrówniej na tej powierzchni. Rozmaz wysuszyć na poziomej płytce grzejnej. Można też dokładnie wysuszyć suszarką. Lepsze wyniki otrzymuje się susząc rozmazy w temperaturze pokojowej przez kilka godzin. Szkiełka z wysuszonymi rozmazami zanurzyć w roztworze barwiącym na 10 min. Następnie zanurzyć szkiełko w wodzie w celu usunięcia nadmiaru barwnika Rozmazy ponownie wysuszyć.

Oznaczenie liczby komórek somatycznych

Przy użyciu mikroskopu policzyć w rozmazie jądra komórek (co najmniej 400). Są one wyraźnie rozpoznawalne. Liczyć jądra zawarte w pionowych pasmach pola widzenia w środkowej części rozmazu odpowiadającej 1/3 jego powierzchni. Unikać pasm wybranych wyłącznie z obrzeży rozmazu.

Obliczenia i sposób przedstawiania wyników

Długość pojedynczych liczonych pasm wynosi 5mm. Szerokość pasma odpowiada średnicy pola widzenia mikroskopu. Dla badanej objętości 0,01 ml próbki obliczyć współczynnik roboczy wg. następującego wzoru

Wfi ^20x,00/_dxb

d - średnica pola widzenia mikroskopu w mm b - liczba pasm policzonych w całości

Aby uzyskać liczbę komórek w badanej próbce, należy liczbę policzonych komórek somatycznych pomnożyć przez współczynnik roboczy Wf