Obrazek 0001(1)

50

ĆWICZENIA

ĆWICZENIE 13

TEMAT: MORFOLOGIA KOMÓRKI BAKTERYJNEJ

Cel: Określanie kształtu i wielkości komórek oraz

charakterystycznych form skupisk. Preparaty barwione metodą Lóefflera - m. prosta pozytywowa

CHARAKTERYSTYCZNE KSZTAŁTY KOMÓREK I FORMY SKUPISK BAKTERII

r

ZIARNIAKI

ZIARNIAK

coccus

PAKimmmo

KC

SHRGIHD

DWOINKA DIPIOGOGOUS	TETRADA (czwóniak) 8» TETRUCOCCUS
OHOfiKOWIEC	PHCIORKOWIEC
STRPHYIGGOCCUS	SIBEPTOGOCCUS

FORMY CYLINDRYCZNE

«    ko ko oate czka

mm    pałeczka - bacterium

■hi    laseczka-bacillus

mmmmm forma nitkowata

Metoda barwienia błękitem metylenowym -Lóefflera ma zastosowanie przy ustalaniu liczby drobnoustrojów w mleku oraz przy ustalaniu liczby żywych komórek drożdży w kulturach używanych w przemyśle fermentacyjnym. Żywe komórki drożdży nie barwią się błękitem, zaś komórki martwe są w preparacie wybarwione na kolor niebieski.

pateriały:

1.    24 h hodowle szczepów o znanej przynależności systematycznej

2.    Płytki z posianym do pojedynczych kolonii materiałem z dowolnie wybranych źródeł

3.    Szkiełka przedmiotowe

4.    Probówka z jałowym płynem fizjologicznym

5.    Zestaw do barwienia: mydełko, szmatka bawełniana, wanienka, tryskawka z wodą

destylowaną, szczypce C orneta 6. Błękit metylenowy Lóefflera

W bakteriologii używa się także terminu laseczka - baciilus. Termin ten odnosi się do form pałeczkowatych posiadających zdolność wytwarzania endospor - przetrwalników.

ijWykonanie:

jj    1.    Odtłuścić szkiełko przedmiotowe przy pomocy mydełka i lnianej szmatki

!!    2.    Przygotować cienki rozmaz badanego materiału. W zależności od tego,

|l    czy materiałem wyjściowym jest 24 h hodowla na podłożu płynnym (patrz: Materiały

jj    - punkt 1) czy pojedyncza kolonia (patrz: Materiały- punkt 2) należy, odpowiednio:

ii 3. Przenieść jałową ezą 1-2 oczka na powierzchnię szkiełka przedmiotowego;

i rozprowadzić po powierzchni w formie cienkiego rozmazu    j

;j    4. Nanieść kroplę płynu fizjologicznego z probówki-i rozprowadzić w niej materiał;

jj    pobrany ezą, z zachowaniem warunków jałowości, z brzegu typowej, pojedynczej ;

kolonii

jj 5. Wysuszyć rozmaz w powietrzu

|    6. Utrwalić suchy preparat w płomieniu.palnika

j 7. Nawarstwić preparat błękitem metylenowym na 5 min

jj 8. Spłukać preparat wodą; wysuszyć odciskając nadmiar wilgoci z preparatu przy;

pomocy bibuły filtracyjnej.    ;

jj 9. Nawarstwić preparat olejkiem immersyjnym; oglądać pod mikroskopem posługując;

się obiektywem immersyjnym (100x)

;j 10. Wyniki obserwacji mikroskopowych zamieścić w tabelil 7