Obrazek 07(1)

90

METODA PŁYTKOWA;

1.    Metoda posiewów powierzchniowych

2.    Metoda posiewów zalewanych

3.    Metoda filtrów membranowych

SPOSÓB POSIEWU POWIERZCHNIOWEGO

•    Na powierzchnię podłoża stałego na płytkach /wybór podłoża zależy od oznaczanej grupy drobnoustrojów/ przenieść po 0,1 m[ z kolejnych rozcieńczeni dziesiętnych wyjściowego, materiału

•    W przypadku materiału płynnego, jednorodnego oraz spodziewanej, niskiej liczebności oznaczanej grupy drobnoustrojów, (na poziomie 10³ - 10^ł j^lk/ml), wykonywać posiew bezpośredni wyjściowego materiału. Posiany materiał rozprowadzić po powierzchni podioża, przy pomocy szklanej bagietki

•    Posiewy inkubować w temperaturze optymalnej dla oznaczanej grupy drobnoustrojów

» Po inkubacji posiewów, do liczenia wybrać płytki na których liczba wyrosłych kolonii

mieści się w przedziale 30 - 300

•    Na wybranych do liczenia płytkach, w zależności od kierunku prowadzonych oznaczeń oraz użytego podioża, liczyć bądź wszystkie wyrosłe kolonie, bądź kolonie rosnące w sposób charakterystyczny dla oznaczanego drobnoustroju (oznaczanej grupy)

Rys. 16

SPOSÓB POSIEWU ZALEWANEGO

•    Na dno pustej, jałowej płytki przenieść po_1 ml materiału z kolejnych rozcieńczeń dziesiętnych (lub nierozcieńczonego mateTiaKTTyyjściowego o ile jest to materiai płynny, a spodziewana liczebność oznaczanych drobnoustrojów na poziomie

10² —10³ jtk/ml)

•    Zalać podłożem agarowym, rozpuszczonym i odpowiednio schłodzonym i dokładnie wymieszać

» Posiewy inkubować w temperaturze optymalnej dla oznaczanej grupy drobnoustrojów

Po inkubacji posiewów, do liczenia wybrać płytki, na których liczba wyrosłych kolonii mieści się w przedziale 30 - 300

Na wybranych do liczenia płytkach, w zależności od kierunku prowadzonych oznaczeń oraz użytego podłoża, liczyć bądź wszystkie wyrosłe kolonie, bądź kolonio rosnąca w sposób charakterystyczny dla oznaczanego drobnoustroju (oznaczanej grupy)

Rys. 17

/w

Wykonanie posiewu zalewanego

Wykonać nuclcócienia jak na rys,

^—---■ ImledDouaiulnlESD

r „    ▼ raicieńcienia

/'    -15 ml

agam aiŁżywczese KL ^

ł

wymiesi ttć ruchem okrutnym

ł

v    Inkubować

METODA FILTRÓW MEMBRANOWYCH

•    Przefiltrować badany płyn przez filtr membranowy (patrz ćwiczenie nr 29)

» Przemyć ścianki urządzenia filtrującego 20 ml roztworu jałowej soli fizjologicznej, zebrany płyn przetiltrować (następuje zmycie drobnoustrojów pozostałych na ściankach filtra)

•    Zdjąć filtr z podstawki jałową pincetą 1 ułożyć na powierzchni pożywki agarowej w płytce Petńego, powierzchnią filtrującą do góry

•    Inkubować filtr w cieplarce 24-36 godz.

•    Policzyć liczbę wyrosłych kolonii

•    Metoda ta stosowana jest praktycznie do oznaczania ilości drobnoustrojów w wodzie oraz określania ilości drobnoustrojów w powietrzu. W tym przypadku specjalne urządzenie zasysa przez filtr określoną objętość powietrza, po czym filtr układa się na powierzchni pożywki

Rys. 18    i