MP

pojedyncze kolonie bakterii i oczyszczono metodą posiewu redukcyjnego na płytkach ze zestalonym podłożem agarowym

5. Po upływie następnych 48 godzin wybrano pojedynczą kolonię bakterii i przesiano ją na skosy agaraowe w celu namnożenia biomasy.

Sporządzono preparaty mikroskopowe wybarwione metodą Grama, w celu zbadania morfologii bakterii.

6. Po namnożeniu się bakterii na skosach agarowych spłukano biomasę do kolb stożkowych zawierających płynną pożywkę Kojima z dodatkiem: a) fenolu (5 mM) b)katecholu (5 mM)

7b. Do oznaczenia katecholu wykonano następujące czynności:

-    pobrano 1 ml supernatantu -dodano 1 ml 10% Na₂Mo04 2H₂0

-dodano 0,5 ml 0,5 M HCI

-    dodano 0,5 ml NaN02 -dodano 1 ml 10 % NaOH

7.Po upływie 7 dni inkubacji dokonano pomiaru stężenia biomasy w założonych hodowlach.

Oznaczono spektrofotometrycznie gęstość hodowli poprzez pomiar absorbancji przy długości fali 600 nm wobec próby ślepej

7a. Do oznaczenia fenolu wykonano następujące czynności:

-    pobrano 1 ml supernatantu -dodano 4 ml wody destylowanej -dodano 1 ml dwuazowanej para-nitroaniliny

-kolejno dodano 0,5 ml 10% NazCOsi 1 ml 10 % NaOH

-    uzupełniono do 10 ml wodą destylowaną

\J

8. W spektrofotometrze zmierzono absorbancję przy długości fali (480 nm dla katecholu, 550 nm dla fenolu) wobec prób ślepych, w których supernatant zastąpiono wodą.