Obraz (45)

4.3 pośrednia konkurencja przeciwciał (indirect antibody competition)

I-Ag + Ab + Anti-Ab*E + S    —>    Odczyt

+ AB (at various dilutions)

W    W    W

Krok 1 - pasywna adsorbcja antygenu na powierzchni płytki (inkubacja w odpowiednim buforze) Krok 2 - płukanie

Krok 3 - dodanie i inkubacja testowanego przeciwciała AB w różnych rozcienczeniach Krok 4 - płukanie (opcjonalnie)

Krok 5 - dodanie i inkubacja przeciwciała (surowica standardowa)

Krok 6 - płukanie

Krok 5 - dodanie i inkubacja znakowanego enzymem koniugatu surowicy gatunkowo-specyficznej skierowanej przeciwko Ab Krok 6 - płukanie

Krok 7 - dodanie i inkubacja systemu wywołującego kolor Krok 8 - odczyt

Serum contains antibodies    Serum contains NO antibodies

which bind to antigen    which bind to antigen

Pre-titratkm of indirect system

Competition-addition of samples containing antibodies?

On addition of anti-species enzyme labelled conjugate

/Si

Conjugate does not bind	Conjugate binds
l ° C&:
No color		Color

COMPETITION    NO COMPETITION

A pretitrated system for antibody binding to antigen is challenged by the addition of another serum (test) sample. If antibodies bind to the sites in common with the pretitrated antibodies, they błock (if added before pretitrated antibody) or compete with (if added simultaneously) this reaction. Since an antispecies conjugate is used, the com-peting sample serum cannot be from the same species.