Obraz (47)

4.4 pośrednia konkurencja antygenu (indirect antigen competition)

I-Ag + Ab + Anti-Ab*E + S    —>    Odczyt

+ Ag (free froni test sample)

W    W    W

Krok 1 - pasywna adsorbcja antygenu na powierzchni płytki (inkubacja w odpowiednim buforze) Krok 2 - płukanie

Krok 3 - jednoczesne dodanie i inkubacja wolnego antygenu (próba badana) i przeciwciała w odpowiednim rozcieńczeniu (określonym wcześniej)

Krok 4 - płukanie

Krok 5 - dodanie i inkubacja znakowanego enzymem przeciwciała Krok 6 - płukanie

Krok 7 - dodanie i inkubacja substratu Krok 8 - odczyt

Pre-titration #f indirect system

Addition of same or similar antigen    Addition of antigen difTerent to that

to that on solid phase    on solid phase

No color-100% competition    Color-no competition

The pretitrated indirect ELISA is competed for by antigen. If the antigen shares antigenic determinants with that of the solid-phase antigen, it binds to the pretitrated antibodies preventing them from reacting with the solid-phase antigen. If there is no similarity, the antibodies are not bound and can react with the solid-phase antigen. Addition of the antispecies enzyme conjugate ąuantifies the bound antibodies.