Skrypt

2.    Po obejrzeniu hodowli komórkowej pod mikroskopem świetlnym, za pomocą sterylnej pipety usunąć zużyte podłoże.

3.    Hodowlę przepłukać 3 ml roztworu PBS bez jonów wapnia i magnezu.

4.    Usunąć PBS, a do naczynia hodowlanego dodać 2 ml roztworu trypsyny z EDTA.

5.    Przepłukać hodowlę i usunąć roztwór enzymu.

6.    Hodowlę należy wstawić do cieplarki i inkubować w temperaturze 37°C do czasu odklejenia się komórek od dna naczynia (około 1-3 minuty).

7.    Komórki zawiesić w 4 ml pożywki.

8.    Przenieść 2 ml zawiesiny komórek do nowej butelki.

9.    Uzupełnić w obu butelkach płyn hodowlany do objętości 5 ml.

10.    Umieścić naczynia hodowlane w inkubatorze i hodować w 37°C z 5% przepływem C0₂.

B. Pasażowanie hodowli komórek rosnących w zawiesinie

Przed przystąpieniem do pracy przygotuj:

1.    Hodowlę komórek (np. RPMI 8226).

2.    Naczynia hodowlane (plastykowe butelki o powierzchni 25 cm²).

3.    Sterylne pipety szklane.

4.    Pipetor automatyczny.

5.    Podłoże hodowlane (MEM) z dodatkiem 10% płodowej surowicy cielęcej.

6.    Pojemnik szklany na zlewki.

Wykonanie:

*V-'

1.    Ogrzać podłoże hodowlane do temperatury pokojowej.

2.    Po obejrzeniu hodowli pod mikroskopem, przenieść zawiesinę komórek do gilzy wirówkowej.

3.    Zrównoważyć naczynia na wadze.

4.    Wirować 5 minut przy lOOOg.

5.    Usunąć zużyte podłoże hodowlane.

6.    Osad komórek zawiesić w 4 ml świeżego podłoża hodowlanego.

7.    Przenieść po 2 ml zawiesiny do nowych naczyń hodowlanych.

14