5

1

Interpretacja wyników

Liczba królików	Produkt spełnia wymagania badania, jeżeli suma przyrostów temp. nie przekracza	Produkt nie spełnia wymagania badania, jeżeli suma przyrostów temp. przekracza
3	1,15°C	2,65° C
6	2,80° C	4,30° C
9	4,45° C	5,95° C
12	6,60° C	6,60° C

Interpretacja wyników

■    Jeżeli suma przyrostów temperatury ciała królików przekracza wartość podaną w drugiej kolumnie tej tabeli, ale nie przekracza wartości podanej w trzeciej kolumnie, badanie powtórzyć jak opisano wyżej.

■    Jeżeli suma przyrostów temperatury ciała królików przekracza wartość podaną w trzeciej kolumnie tabeli, produkt nie spełnia wymagania badania.

METODA Z UŻYCIEM LIZATU AMEBOCYTÓW SKRZYPŁOCZA -

LAL (Limulus Amebocyte Lysate)_

■    w amebocytach (elementach morfotycznych) skrzypłocza występuje białko, które krzepnie w zetknięciu z endotoksyną:

■    mechanizm: endotoksyną aktywuje zawarty w lizacie enzym, który w wyniku reakcji z białkiem lizatu - koagulogenem, wytwarza spolimeryzowane białko - koagulinę w postaci żelu

■    ilość powstałego żelu jest proporcjonalna do ilości endotoksyny

Metody oznaczeń

■    Metoda że! - skrzep; polega na uzyskaniu trwałego skrzepu w próbkach zawierających endotoksyny;

■    Metoda zmętnieniowa; stężenie koagulogenu w lizacie jest tak dobrane, że pozwala na powstanie wyłącznie zmętnienia;

■    Metoda kolorymetryczna; polega na wywołaniu zmętnienia, a po odwirowaniu precypitatu oznaczeniu w nim białka; zawartość białka jest wprost proporcjonalna do stężenia endotoksyny;

■    Metoda chromogenowa; koagulogen jest zastąpiony barwnym substratem; natężenie barwy jest wprost proporcjonalna do stężenia endotoksyny;

	Wykonanie oznaczenia
	■    należy odmierzyć właściwą objętość lizatu do naczynia, a następnie dodać taką samą objętość badanego preparatu w odstępach czasowych, umożliwiających przy odczytywaniu wyników zachowanie jednakowego czasu inkubacji dla wszystkich prób ■    próby delikatnie wymieszać i inkubować 60 min w temp. 37 +/-1 °C, zabezpieczając przed wstrząsami i parowaniem ■    ocenić wyniki oznaczeń - wynik dodatni -powstanie spoistego żelu, który nie rozrywa się i deformuje

5