PCR (1)

a następnie w temperaturze 47-65°C odbywa się hybrydyzacja starterów (przyłączenie do miejsca komplementarnego), które trwa 30 60 sekund, aż w końcu następuje synteza nici komplementarnych (wydłużanie startera od końca 3'-OH) w 72°C pr/.ez. 60-120 sekund (rys. 3). Dodatkowe wydłużenie ostatniego etapu syntezy w 72"C powoduje uzyskanie właściwej długości amplifikowanego fragmentu DNA.

W pierwszym cyklu produkty pierwszorzędowego wydłużania startera powstają na bazie matrycy DNA wykorzystanej do reakcji (rys. 4a). W drugim cyklu produkty drugorzędowe (o nieokreślonej długości) powstają w wyniku syntezy DNA po denaturacji picrwszorzędowych produktów (rys. 4b, c).

Rysunek 3. Profil termiczny pojedynczego cyklu reakcji PCR

a

5'

3- —

I I I I I I I I I I I 1 1 I I I I I I I

³'

~    5'

I CYKL

f^\    Początkowa matryca (+)

^ 1111 lilii i

I I I I I I I I I I

Początkowa matryca (-)

Początkowa matryca (+)

’ 1111111111

starter reverse

starter forward

* ~ J-łll I 1 I I I I -T\j

Początkowa matryca (-)

Rysunek 4. Powstawanie produktów aniplilikaeji w trzech pierwszych cyklach łańcuchowej reakcji polimcrazy: a - produkty pierwszorzędowe po pierwszym cyklu

— 27 —