Skan
99

- 174 -

3.3.4. Przećt

siny zawierającej ok. 10^ wirionów. Po dokładnym wymieszaniu płynne jeszcze podłoże rozlać natychmiast na powierzchnię 5% agaru odżywczego, zestalonego w płytkach Petriego (obie warstwy agaru muszą być wyrównane w poziomie, gdyż tylko wtedy uzyskuje się równomierny rozrzut zakażonych komórek w pożywce). (Eak przygotowane płytki inkubować przez noc w temp. 57°. Po inkubacji wlać do. każdej płytki po 5 ml bulionu odżywczego, zebrać jałową bagietką wierzchnią warstwę agaru miękkiego i przenieść do butelki zawierającej 20 ml bulionu odżywczego. Całość wytrząsać przez JO min, a potem odwirować przy małych

obrotach. Ostateczna wydajność faga w płynie znad osadu osią-ga wysokie miana rzędu 5 2: 10 wirionów łysinkotwórczych w

1 ml.

3.5.2.

Płynną hodowlę szczepu wskaźnikowego w logarytmicznej fazie wzrostu zakazić lizatem fagowym według optymalnej proporcji. Mieszaninę intubacyjną pozostawić w cieplarce o temp. 37° do momentu przejaśnienia hodowli. Zlizowaną hodowlę przesączyć przez sączek bakteryjny.

p*3»3.,

Czynność tę poprzedza oczyszczenie lizatu z wszelkich pozostałości komórkowych lub całych komórek bakteryjnych. W tym celu należy odwirować lizat fagowy przy małych obrotach lub przesączyć przez pulpę papierową na- sączku Bdchnera. Wstępnie oczyszczony lizat sączyć przez sączki bakteryjne porcelanowe albo szklane. Sączki Seitza nie są do tego celu polecane, gdyż adsorbują znaczne ilości faga, co jest powodem strat. Wstępnie oczyszczony lizat fagowy można również przygotować do przechowania, poddając go działaniu chloroformu: 0,5 ml chloroformu zmieszać z 10 - 20 ml lizatu, wytrząsnąć dokładnie i pozostawić w temperaturze 37° przez 15 min, W tym czasie chloroform opada na dno probówki. Płyn znad chloroformu odciągnąć pipetą i rozlać jałowo do probówek.

Przygotowanie szereg czynności, lać jałowo do a.i;t tych zasad. Kie z cjonowanych szcze Większość fag na w bulionie oćż inaktywują się :iB. żywkach syntetyez wej kilka mcg/ml siną faga przećnc ni (4°).

ragi ulęganą promieni    -

przez 5 h), preni-malne dla fagów p z bakteriami ich 56% alkohoi et; lc zabijają je szync wywierają na nie ' czą fagi et osunie, zieleń malachit

3.4. Mianot«.n:

Miano faga je; lizatu.

Oznaczacie ni.

Przygotować Al minimum. 2 mm i yn: każeniem. Przygotf ny faga. Do probćv 0,7% agaru odżywc: dodać po 0,5 ci k< 18-godzinnej hoóov wek dokładnie wym: