Skan
98

i-U

- *173 ~

■ Ifeitl

. ; jsffejp

-

caźnikowym, tj»

;go faga. Po ponow-J7° przez noc. Od-Lub braku lizy albo

ni młodej hodowli j zesączu. Identyczna zesączu służy jako i porównywać sto-do hodowli kontroł-fagi, w miarę postę-jaśniaó, a w końcu zat fagów y, .cz poddać kontroli zych łysinek.

nego cyklu reprodukcji faga za zlizowanych komórek b« nych uwalnia się do otoczenia wielokrotnie zwiększony iiion^p tomnych fagów (jedna kom6rjkajbakbe^

wŁondw^. Zakażając fagiem coraz to nowe komórki bakteryjne,^-można prowadzić namnażanie teoretycznie nieskończenie i

Wstępną hodowlę czystą faga zakłada się w zwykły sposób Do probówki z bulionem odżywczym zostaje pobrany ezą aateriał|:|||pi£i z pojedynczej łysinki łącznie z odrobiną bakterii wyrosłych obwodzie łysinki. Założoną w ten sposób hodowla faga jest in-kubowana przez noc w temp. 37°- Hodowla taka posiada niskie Cv miano faga.

Otrzymanie hodowli faga o wyenlrim mianie wymaga zastosowania odmiennej metodyki. Zakładając do tego celu tzw. mlesza-

y?^cb ^,^{6rek w} _

^twórcz^ch (biojo^iczM,i.„gkty”pyctil. ® użytej do zakażania zawiesinie. Proporcje te są ustalane doświadczalnie przez oznaczenie miana hodowli bakteryjnej oraż^Bianą,jfaga. Zasada uży-

■M:..

■Jtⁿ

czysty szczep (klon); materiał przez dot- % i na płytce agarowej,0

ikubowaś w temp. 37°

.•otnie powtórzyć. 0- M :enia wstępnej czyś- ;jg}

ŚM

#if|

m

jJtS:

celu utrzymania daner^ll uzyskania określonycbęiI h. Hodowla fagów wy-;||||^ ogicznymi, optymalnymi a, Mogą to byc podło-dowli faga polega na-f3? Po przejściu peł-'"’

cia hodowli bakteryjnej o znanej liczbie żywych komórek w jednostce objętości wiąże się z koniecznością użycia hodowli o minimaln7m odsetku komórek martwych, tj. hodowli » logarytmicznej fazie wzrostu.,'W^oływa to z faktu, że fagi zaadsorbo-wane na martwych komórkach bakteryjnych nie reprodukują się w nich, nie tworzą łysinek, a zatem nie ujawniają swojej obecności, co prowadzi do fałszywych wyników doświadczeń. W celu uzyskania możliwie wysokiego plonu faga, należy się posługiwać określoną metodyką, narzucającą ścisłe warunki postępowania. Istnieją specjalne metody namnażania faga dające plon o wysokim mianie.

3.3.1. Hodowla metodą dwuwarstwowa według Adamsa

Rozlać do probówek (liczbę probówek ustala się w zależności od potrzeb) po 2,5’ml 0,7-proc. (miękkiego) agaru odżywczego i pozostawić w łaźni wodnej o temp. 46°. Do agaru wkropłlć po 1 ml hodowli szczepu wskaźnikowego w logarytmicznej fazie wzrostu (ca 10^ komórek/1 ml) oraz po 1 ml zawis-