skanuj0002

<JUV J

<JUV J

Wykonanie ćwiczenia

a>ę?

fMsL- iCOOOcłh^?

T ouA J * ' 5"

,|S *'"a-'AC'10'^ft.

i5x

1. Przygotowanie roztworów i ekstraktów

a) sporządzić 50,0 cm³ roztworu DPPH o stężeniu 3,3 • 1 O*⁴ mol/dm³ w 96 % alkoholu

etylowym

lifsporządzić rozcieńczenia ( 50% etanolem) otrzymanych etanolowych ekstraktów o    \> j

stężeniu 50 g mokrej masy/ 100 ml ekstraktu:    (rśTś>^X-

^^erę^<) Ą

o ekstrakt kapusty białej rozcieńczyć: 2,3 i 5-krotnie,, o ekstrakt czerwonej kapusty rozcieńczyć: 2<5>,<fifei< ” c) sporządzić 50,0 cm³ wodnego roztworu kwasu askorbinowego o stężeniu 10 mmol/dm³. Następnie rozcieńczyć go tak, aby otrzymać roztwór o stężeniuk),5, mmol/dm"

S■iDo'i-^rLt -j-cricĄ@i^:

■ ^ o'

2. Reiestracia widm absorpcVmvch. Sprawdzić „ustawienia’

a)    zarejestrować widmo absorpcyjne w zakresie 330 - 800 nm dla ekstraktów białej i czerwonej kapusty dla stężenia...

b)    zarejestrować Widmo absorpcyjne dla roztworu DPPH o stężeniu 1,7 • 10^-4 mol/dm³ w 96% alkoholu etylowym

3. Przeprowadzenie reakcii zmiatania rodnika DPPH przez ekstrakty roślinne. zmienić„ ustawienia”

a)    w kuwecie ze szkła optycznego umieścić 1,0 cm³ roztworu DPPH o stężeniu

3,3 • 10^-4 mol/dm³ oraz 1,2 cm³ wody destylowanej, wymieszać, zmierzyć absorbancję, Ao tak otrzymanego roztworu (powinna zawierać się w granicach 1,3-1,4)    .    ^:    v

b)    do pięciu kuwet ze szkła optycznego odpipetować po 1,0 cm³ roztworu

DPPH o stężeniu 3,3 • 10^-4 mol/dm³, po 1,0 cm³ wody destylowanej, wymieszać,

c)    przygotować spektrofotometr UV-Vis Marcel Media do pomiaru (program kinetyczny, czas rejestracji absorbancji, długość fali)

d)    do kuwety zawierającej 1,0 cm³ roztworu DPPH i 1,0 cm³ wody dodać (w tym samym momencie włączyć stoper) 0,2 cm³ nierozcieńczonego ekstraktu białej kapusty, wymieszać, wstawić do spektrofotometru. W tym czasie draga osoba powinna dodać do kolejnej kuwety 0,2 cm³ 2-krotnie rozcieńczonego ekstraktu wymieszać ...itd.dlakolejnych rozcieńczeń. Do ostatniej, piątej kuwety dodać 0,2 cm³ roztworu witaminy C. Pomiar kontynuować przez 60 minut.

e)    do pięciu kuwet ze szkła optycznego odpipetować po 1,0 cm³ roztworu

; DPPH o stężeniu 3,3 • 10"⁴ mol/dm³, po 1,0 cm³ wody destylowanej, wymieszać Dodawać kolejno po 0,2 cm³ nierozcieńczonego i rozcieńczonych ekstraktów kapusty czerwonej.    _    X

^    \ O cm* ; . _;ti

MA \

Y\ «\V«

j

!    & <s/

:&_:ro

Opracowanie wyników

1.    Porównać widma UV-Vis ekstraktów białej i czerwonej kapusty. Odczytać X_mtx z widma etanolowego roztworu DPPH. Wytłumaczyć, dlaczego tę wartość wybiera się jako długość fali, przy której monitoruje się reakcję zmiatania rodnika przez antyoksydanty zawarte w ekstrakcie kapust białej i czerwonej.

2.    Narysować wykresy absorbancji od czasu ( A = f(t) ) reakcji pomiędzy DPPH i antyoksydantami zawartymi w ekstraktach białej i czerwonej kapusty dla różnych stężeń ekstraktów.

3.    Przekształcić powyższe wykresy na Zależności procentu ubytku DPPH od czasu, przyjmując Ao jako 100 %.

4.    Sporządzić wykresy (osobno dla kapusty białej i czerwonej) zależności procentu ubytku DPPH od stężenia, wyznaczyć wartość IC₅o, czyli stężenie dla którego % ubytku osiąga 50%.

5.    Aktywność zmiatania rodnika ( ang. radical scavenging activity, RAS), RAS względem DPPH wyliczyć z następującego równania

% RAS = [(Ao - AO / Ao ] • 100%

Wyliczyć % RAS dla t = 60 minut, dla poszczególnych stężeń ekstraktów kapusty białej, czerwonej i witaminy C, wyniki zebrać w tabeli.

6.    Sformułować wnioski.

Go2

i _L.