skanuj0011

u

BARWIENIE BAKTERII - barwienie proste pozytywne i negatywne

Barwienie służy do uwidocznienia kształtu komórki lub jej struktury. Do barwienia stosuje się najczęściej zasadowe barwniki anilinowe w których barwna chromoforowa grupa występują w postaci kationu. Powinowactwo barwników zasadowych do bakterii jest związane z występowaniem w komórce dużej ilości grup fosforanowych kw. nukleinowych co nadaje cytoplazmie kwaśny charakter dlatego stosunkowo łatwo łączy się ono z barwnikami zasadowymi które posiadają ładunek +. Do najczęściej stosowanych w bakteriologii barwników należą: błękit metylowy, fiolet goryczki, fiolet krystaliczny, fuksyna, safranina, zieleń malachitowa.

I.    Barwienie proste pozytywne.

Wykonanie rozmazu

Nanieść bakterie na szkiełko podstawowe.

•    W przypadku wykonywania preparatu z hodowli płynnej wystarczy nanieść na szkiełko kroplę hodowli lub pobrać odrobinę bakterii jałową ezą (czyli wyżarzoną w płomieniu palnika) i rozprowadzić zawiesinę na powierzchni szkiełka.

•    W przypadku wykonywania preparatu z bakterii wyrosłych na podłożach stałych należy materiał pobrać jałową ezą (jw.), następnie zawiesić bakterie w kropli wody destylowanej lub soli fizjologicznej naniesionej na szkiełko podstawowe.

Tak naniesioną na szkiełko zawiesinę rozprowadzić sterylną ezą tak aby uzyskać cienki rozmaz komórek.

Preparat suszymy. Po wysuszeniu utrwalić preparat przez przeciągnięcie szkiełka podstawowego nad płomieniem palnika. Należy uważać, żeby nie trwało to zbyt długo i żeby bakterii nie przypalić!!!

Barwienie preparatu

-Umieścić utrwalony preparat na wanience do barwienia.

-Zalać preparat fuksyną i barwić 30 sekund.

-Zlać do wanienki nadmiar barwnika.

-Spłukać preparat wodą destylowaną (z tryskawki).

-Wysuszyć preparat.

-Nanieść kroplę olejku immersyjnego bezpośrednio na wybarwiony preparat (bez szkiełka nakrywkowego!!!). -Oglądać preparat używając obiektywu dającego 100x powiększenie.

Obserwujemy wybarwione komórki na niezabarwionym tle.

II.    Barwienie proste negatywne.

-Wykonać rozmaz jak powyżej.

-Na wysuszony i utrwalony rozmaz nanieść barwnik NIGROZYNĘ cienką warstwą ezą z oczkiem.

-Tak przygotowany preparat pozostawić do wyschnięcia.

-Dokładnie umyć ezę po barwieniu pod bieżącą wodą!!!

-Nanieść kroplę olejku immersyjnego bezpośrednio na wybarwiony preparat (bez szkiełka nakrywkowego!!!). -Oglądać preparat używając obiektywu dającego 100x powiększenie.

Tło jest zabarwione, komórki pozostały bezbarwne.

3