270220121309

1

.walki lub ucieczki"). W pierwszej kolejności zwiększa si a ponieważ w roztworach rozcieńczonych hemoglobina ma^ two do tlenu - jest to mało kosztowny energetycznie meeha^W^ k transport tlenu do tkanek Kolejny etap to wzrost liczby Sh * w wyniku skurczu śledziony, która jest narządem

w wyniKU skupczu sieaziony, wora jest narząaem maga? wzrasta więc także poziom hemoglobiny. Bardziej odległym w 'wSc rfTtótan»a    może być aktywacja erytropoezy, którei    %

w oraz zwiększony udział komćrek

działania stresora może wzrost poziomu erytrocytów

Hematokryt (Ht)

Wykonanie oznaczenia:

ir~

s

Do heparynizowanych kapilar hematokrytowych pobier? wysokości)    JS

Czysty (bez krwi) koniec każdej rurki zatkaj wbijając go _w (we wnętrzu kapiłary powinno być ok. 5 mm plasteliny), ^kką _D, Kapilary umieść (symetrycznie) w wirniku wirówki hematni, ' Hk z plasteliną musi dokładnie przylegać do obwodu wirnika) °^°Wej * Odwiruj 5 min przy 12000 obr./min w wirówce mikrohematok Odczytaj wartość Ht [%] za pomocą czytnika (suwaka) hem ^ ^ ułóż kapilarę w szczelinie czytnika, plasteliną do dołu tau ^ato|(rVtow₍

______Ł_________:___i___*r\r\    _ ,___"

Sty

(do

ty

warstwy osocza sięgała podziałki 100, a koniec osadu krwiń plastelinę) znajdował się na linii 0. Odczytaj wartość - ■ ^e* warstw krwinek i osocza.

Liczebność erytrocytów (RBC)

i

Podziałki „_a

n

Orani

Wykonanie oznaczenia:

1. W plastikowej probówce przygotuj 0,9 cm³ płynu Hayema lub o 6®/ wanego roztworu NaCI (od 1 cm³ odejmij 10 mm³).    ’ ⁰

2    Dodaj 10 mm³ heparynizowanej krwi (rozcieńczenie krwi i:tQQ\ j ^

wymieszaj,    ^alnie

3    Pod mikroskopem obejrzyj pustą komorę Burkera: znajdź małe i duże k draty (rys 4). znajdź początek siatki (pierwszy górny lewy mały kwadrat)

4. Przygotuj komorę Burkera. nakładając szkiełko nakrywkowe na zwilżone prowadnice.

5    Ponownie bardzo dokładnie wymieszaj próbę.

6    Wprowadź krew do komory hemocytometru (dotykając kapilarą z rozcieńczoną krwią brzegu szkiełka nakrywkowego). Umieść hemocytometr na stoliku mikroskopu,

7    Odczekaj, aż krwinki osiądą na dnie komory.

8    Ucz erytrocyty pod powiększeniem 400, we wszystkich (81) małych kwadratach zgodnie z .regułą dwóch boków” (rys. 5).

9    Oblicz liczbę krwinek w mm³ krwi (RBC) według wzoru:

RBC = (a x 4000 x b) / c. gdzie: a - suma krwinek zliczonych we kwadratach, b - rozcieńczenie krwi (100), c - liczba kwadratów (81). W tość 1 małego kwadratu wynosi 1/4000 mm³.

Rys 4 Fragment (1/9) siatki Burkera: 1 - duży kwadrat, 2 - mały kwadrat

Rys. 5. .Reguła dwóch boków" (zlicza się krwinki leżące wewnątrz, nie dotykające krawędzi kwadratu oraz te, które dotykają krawędzi górnej i lewej, pomija natomiast te, które dotykają krawędzi dolnej I prawej)

Stężenie hemoglobiny we krwi (Hb)

Oznaczenie stężenia hemoglobiny we krwi metodą Drabkina wykorzystuje przekształcenie hemoglobiny w cyjanmethemoglobinę, która daje stabilne zabarwienie. Poziom CNMetHb oznacza się spektrofotometrycznie przy długości fali 540 nm. Zawartość Hb oblicza się z równania regresji lub wykresu zależności między ekstynkcją a stężeniem Hb wyznaczonego dla wzorcowych roztworów Hb.

Uwaga! Stężenie hemoglobiny podaje się najczęściej w mg/100 cm³. Nasze obliczenia dadzą wynik w mg/dm³.

Wykonanie oznaczenia:

1.    Przygotuj plastikowe probówki z 2 cm³ płynu Drabkina.

2.    Dodaj do każdej 20 mm³ krwi (rozcieńczenie 100 x), wymieszaj i odstaw na 15 minut.

3.    Zmierz ekstynkcję przy 540 nm wobec ślepej próby (płyn Drabkina).

4.    Oblicz stężenie Hb: odczytaj z wykresu dla wzorca (rys. 6) i pomnóż przez rozcieńczenie krwi.

33