DSC00221 (8)

²

startu w odległości₂^Chr°^mat°^8raficznych pokrytych żelem krzemionkowym zaznaczyć linię

nanieść kapilar ^ ^ ^d°^lnej krawędzi płytki. Na cztery punkty położone na linii startu

nastenna u ^P° ~ ²⁰ mikrokropli ekstraktu chloroformowego w ten sposób, tt ka*<fa

^ ^{ą Kro}Plę nanosić po w"    *

_{Płytfcę umj} , ^P ^schmęctu kropli poprzedniej

zawierającej 100 _c ^krawędzią ^startową do dołu w kamerze chromatograficzny

^{Cm m,eszan}'ny rozpuszczalników o następującym składzie;

Benzen

10

eter naftowy    aceton

.. _{ć w} ciągu 15 - 30 minut. Po Kamerę szczelnie przykryć wieczkiem. Chromatogram rozwtj    _{r v}a

, chromatograticzną, /aznaczyc

uzyskaniu wyraźnego rozdziału barwników wyjąć ptyt^Rv

ołówkiem czoło rozpuszczalnika i pozostawić do wyschnięcia.    __. ,

,    _TTV i zaobserwować tluorescencjf

Chromatogram obejrzeć w promieniach lampy v    ^

barwników. Wyznaczyć wartości współczynnika retencji <h^a poszczególnych barwni

2,5    L5

gdzie:

Rf - współczynnik przesunięcia charakterystyczny dla danej substancji w danym układzie rozwijającym, określa położenie danej substancji na chromatogramie; ^x — przesunięcie badanej substancji od linii startu; y - przesunięcie czoła rozwijacza od linii startu.

Wykonać w zeszycie rysunek chromatogramu notując przy każdej plamie jej barwę, nazwę barwnika i wartość    Rf.

3. Wyznaczanie maksimum absorpcji światła dla poszczególnych barwników

Przygotować wyciąg alkoholowy z poszczególnych plam na chromatogramie. "W tym celu za pomocą skalpela zeskrobać żel krzemionkowy z 4 - 5 plam zabarwionych jednakowo, przenieść ten żel do probówki typu "Ependorf” i dodać 1,5 cm³ alkoholu etylowego. Probówkę zamknąć i wytrząsać. Po zabarwieniu się alkoholu wyeluowanym barwnikiem żel odwirować w mikrowirówce (5000 obrotów/minutę). Po odwirowaniu barwnego roztworu przenieść go do kuwety fotokolorymetru. Odczytać absorbancje dla poszczególnych długości fal światła w zakresie 400 - 700 nm, co 10 nm, wobec próby ślepej (alkohol). Przeprowadzi*