f (226)

12.    Rekombinacja z udziałom sekwencji lox P:

a)    katalizowana jest przez drożdżową rekombinazę FLP (O) (enzymem, który przeprowadza rekombinację w obrębie miejsc Lox P jest rekombinaza Cre pochodzenia fagowego)

b)    w układzie cis ioxP ze zgodna orientacją następuje inwersja sekwencji zawartej miedzy nimi (0) (w wyniku rekombinacji następuje delecja sekwencji zawartej między nimi)

c)    w układzie cis lox P z niezgodną orientacja następuje delecja sekwencji (0) (w wyniku rekombinacji następuje Inwersja sekwencji)

d)    ma charakter uprawniony (0)

Sekwencje Lox P to 2 miejsca DNA składające się z palłndromowych sekwencji 13-nukłeotydowych i sekwencji rdzeniowej 8-nukleotydowej, która określa orientację tej sekwencji - ma charakter kierunkowy. Oprócz 2 układów cis Lox P jest Jeszcze układ trans gdzie miejsca te są na różnych cząsteczkach DNA a rekombinacja między nimi prowadzi do translokacji.

13.    Do Vectorette PCR:

a)    używamy starterów sekwencji znanej i adaptora (1)

b)    startera sekwencji znanej I nieznanej (0)

c)    startera sekwencji znanej i sekwencji homologicznej (0)

d)    startera sekwencji znanej 1 zdegenerowanego (0)

Do Vectorette PCR używamy 2 starterów: startera specyficznego - przyłączającego się w obrębie sekwencji znanej i startera posiadającego miejsce annealingu w obrębie kasety vectorette (czyli adaptora)

14.    RACE PCR:

a)    tzn. technika szybkiej ampliflkacji końców chromosomów (0) (technika szybkiej ampllfikaęji końców cDNA)

b)    położenie konkretnych genów (0) (technika umożliwiająca otrzymanie pełnej długości sekwencji, gdy znany Jest tylko fragment)

c)    matryca to cDNA (1)

d)    końce 2', 5' (0) ( są dwie wersje metody które odpowiadają różnym końcom cząsteczki cDNA : 3' RACE I 5' RACE )

15.    Pytanie dotyczyło klonowania TA

Ta cloning bazuje na pewnej właściwości niektórych polimeraz termostablinych np. Taq, a mianowicie na ich cząstkowej aktywności terminalnej transferazy co oznacza że_r niektóre polimerazy w sposób niezależny od matrycy do końca 3' dodają nukleotydy adeninowe tworząc w ten sposób lepkie końce -końce adeninowe są wykorzystywane do klonowania TA. Wektor posiada analogiczne końce tymidynowe -jednonukleotydowe zazębienie wystarcza do tego, by stosunkowo wydajnie ligować produkty PCR z takim wektorem. Jeżeli klonujemy fragmenty restrykcyjne, to DNA klonowane jest ufosforyiowane, w związku z tym można defosforylować wektor i mimo to iigacja zajdzie. Jeżeli natomiast klonujemy produkty PCR to DNA nie jest ufosforyiowane, dlatego przy klonowaniu TA nie można zastosować defosforylowanych wektorów - ponieważ nie połączymy cząstek. Konsekwencją tego jest znaczne tło klonów nierekombinowanych czyli mała wydajność procesu.

16.    Hybrydyzacja różnicowa:

a)    służy do klonowania genów o różnej lokalizacji (0)

b)    służy do klonowania genów o różnym fenotypie (1)

c)    służy do wykrywania specyficznych transkryptów dla danej linii komórek (1)

d)    żadna z powyższych odpowiedzi nie jest prawidłowa (O)

17.    Metoda cDNA AFŁP: (polimorfizm długości amplifikowanych fragmentów cDNA)

a)    ma mniejszą czułość niż hybrydyzacja plus/mlnus różnicowa (0)

b)    stosujemy do syntezy ds DNA (1)

c)    startery dobudowują się z sekwencja 3* (0)

d)    wykorzystujemy dwustopniowa ampllfikację (1) (preamplifikacja i ampllflkaęja selektywna)

19. Do pozycyjnego klonowania genu metodą spaceru po chromosomie wykorzystuje się: mapę zintegrowaną - mamy na niej gen w otoczeniu sprzężonych lod dla markerów molekularnych, bibliotekę genomową uszeregowaną - tzn. musimy dysponować kolekcją klonów bakteryjnych lub droźdżowych z których każdy zawiera określoną porcję genomu i którego lokalizaęję w obrębie biblioteki znamy. Ograniczenia chromosome walklng: obecność sekwencji powtarzalnych (może prowadzić to tzw. walka zbłądzonego) i obecność sekwencji niekłonowalnych (prowadzi do walka zatrzymanego).