LICZENIE KOMÓREK W KOMORZE
BÜRKERA
2011-04-21 08:03:00
Założenia:
Określenie ilości komórek w danej objętości medium lub płynów fizjologicznych jest niezbędne w
póz
niejszych eksperymentach.
Opis procedury:
1. Oddzielić komórki od dna naczyń hodowlanych przy pomocy trypsyny z EDTA, tzn.
 strypsynować komórki .
2. Dodać do zawiesiny komórek medium z surowicą, bardzo dokładnie wymieszać komórki.
3. Sterylną pipetą pasteurowską lub pipetą automatyczną (sterylnym żółtym tipsem) nałożyć
zawiesinÄ™ komórek do komory Bürkera (tzn. wpuÅ›cić komórki pod szkieÅ‚ko nakrywowe).
4. Liczyć komórki w komorze w następujący sposób:
- liczyć komórki w 9 dużych kwadratach (ograniczonych potrójną linią, składających się z 16 małych
kwadratów każdy ograniczonych podwójną linią),
- z otrzymanych 9 zliczeń wyciągnąć średnią,
- w przypadku, gdy komórki są nierównomiernie rozłożone w dużych kwadratach i pozlepiane
między sobą, należy komórki porządnie wymieszać i liczyć je jeszcze raz,
- zaczynać liczenie od lewego, górnego kwadratu
ObjÄ™tość komory Bürkera wynosi 0,0001 cm3 (0,0001 ml)
Ilość komórek w 1 ml wynosi więc: 10.000 x średnia ilość komórek
Ilość komórek w badanej objętości: ilość ml zawiesiny komórek x 10.000 x średnia ilość komórek.
- komory Bürkera należy po każdym użyciu dokÅ‚adnie wymyć wodÄ… z detergentem, dobrze
wypłukać wodą bieżącą, 2-3 krotnie wodą destylowaną i dobrze wytrzeć szmatką lub
 kim-wipesem , szkiełka nakrywowe należy dobrze wymyć wodą z detergentem, dobrze wypłukać
wodą bieżącą, 2-3 krotnie wodą destylowaną, następnie wypłukać w 70% alkoholu etylowym i
dobrze wytrzeć szmatką lub  kim-wipesem . Szkiełka nakrywowe nakłada się na mokro na komorę
Bürkera. Należy zwrócić uwagÄ™ by w miejscu Å‚Ä…czenia szkieÅ‚ek na mokro pojawiÅ‚y siÄ™ pierÅ›cienie
Newtona.
Copyright © 2013 lab-all.com. All rights reserved.
autor: Zakład Biologii Molekularnej Centrum Onkologii  Instytut im. M. Skłodowskiej-Curie
Copyright © 2013 lab-all.com. All rights reserved.
Powered by TCPDF (www.tcpdf.org)