Liczenie komórek, określanie żywotności komórek


KOMORA THOMA/BÜRKERA
Szkiełko nakrywkowe
Głębokość komory 0,1 mm
KOMORA BÜRKERA
3 mm
Morfologia
krwi  liczenie
leukocytów,
erytrocytów,
1 mm
trombocytów
3 mm
1 mm
3 mm x 3 mm x 0,1 mm = 0,9 mm3
KOMORA THOMA  liczenie komórek w
hodowlach in vitro
1 mm
1 mm
1 mm x 1 mm x 0,1 mm = 0,1 mm3 = 0,1 ml
Reguła dwóch boków Burkera
Komórki liczone Komórki nie liczone
Liczenie komórek
X = a/2 x b (komórek /0,1 ml)
X  ilość komórek
a  suma komórek na obu siatkach
b  rozcieńczenie komórek
np.:
Sporządz 10 ml zawiesiny komórek o gęstości 3 x 104 kom./ml, gdy hodowle do liczenia
rozcieńczono dziesięciokrotnie.
1. Liczymy 10 krotnie rozcieńczoną zawiesinę komórek. Na pierwszej siatce otrzymujemy 40 a
na drugiej 38 komórek.
2. Ze wzoru obliczamy ilość komórek w komorze: X = 78/2 x 10 = 390 (kom./0,1 ml)
1 ml  1000 ul
X = 390 x 104 kom./ml
3. SporzÄ…dzanie zawiesiny: X =390x104 kom./ml, V=10 ml zawiesiny, g = 3x104 kom./ml
V x g / X = Y ilość zawiesiny komórek liczonych na komorze w 10 ml płynu hodowlanego
V - Y = ilość płynu hodowlanego
10 ml x 3x104 / 390x104 = 0,077 ml (zawiesiny komórek policzonych na komorze)
10 ml - 0,077 ml = 9,923 ml (płynu hodowlanego)
Barwienie błękitem trypanu
Proste barwienie dające możliwość oceny żywotności populacji komórek. Barwnik
przenika do komórek przez uszkodzoną błoną komórkową, barwiąc je na niebiesko.
Nie pozwala rozróżnić komórek nekrotycznych i apoptotycznych.
Martwe neurony wybarwione błękitem trypany i żywe - fuksyną


Wyszukiwarka

Podobne podstrony:
Ćw 03c Izolacja limfocytów ze śledziony oraz określanie żywotności komórek
Określanie żywotności i proliferacji komórek metodami spektrofotometrycznymi
liczenie komorek w komorze brkera lab all com
Oznaczanie żywotności komórek metodą MTT
Grajnert Józef Dzielny Komorek E book
PROGRAMOWANIE KOMOREK SZPI
Przegląd komórek
Ćw 03a Centralny i obwodowy układ limfatyczny Izolowanie komórek z narządów limfatycznych
Barwienie komórek Analiza mikroskopowa obrazu
Seryjny zabójca komórek nowotworowych
POROWNANIE KOMÓREK
06 Formatowanie komórek
Izolacja mitochondriów z komórek eukariotycznych
Wymagania wzrostowe komórek Podłoża hodowlane

więcej podobnych podstron