ÿþB a r w i e n i e k o m ó r e k , a n a l i z a
m i k r o s k o p o w a o b r a z u
B a r w i e n i e M a y - G r ü n w a l d a - G i e m s y
U m o |l i w i a u w i d o c z n i e n i e
z m i a n m o r f o l o g i c z n y c h k o m ó r e k
p o d w p By w e m b a d a n e j s u b s t a n c j i .
Z a s t o s o w a n i e d w ó c h b a r w n i k ó w
u m o |l i w i a o b s e r w a c j e j d r a
k o m ó r k o w e g o w y b a r w i o n e g o n a
B a r w n i k G i e m s y ( b Bk i t
k o l o r f i o l e t o w y z c i e m n i e j s z y m i
m e t y l e n o w y )
j d e r k a m i ( b a r w n i k G i e m s y w i |e
s i d o D N A ) , o r a z c y t o p l a z m y
p r z y b i e r a j c e j n i e b i e s k o - r ó |o w
b a r w ( M a y - G r ü n w a l d ) .
W p r z y p a d k u b a z o f i l i m o |l i w a
j e s t o b s e r w a c j a c i e m n o n i e b i e s k i c h
g r a n u l w c y t o p l a z m i e a e o z y n o f i l i
j a s n o p o m a r a Dc z o w y c h . E r y t r o c y t y
b a r w i s i n a r ó |o w o .
B a r w n i k M a y - G r ü n w a l d a
Z m i a n y m o r f o l o g i i
Z m i a n y m o r f o l o g i i k o m ó r e k p o d
H o d o w l a k o n t r o l n a
w p By w e m b a d a n e j s u b s t a n c j i .
W o u n d a s s a y - t e s t z r y s
R y s a ( w o u n d )
A b y o s z a c o w a p o t e n c j a l n
z d o l n o [ b a d a n e j s u b s t a n c j i d o
h a m o w a n i a m i g r a c j i k o m ó r e k
p r z e p r o w a d z a s i t a k z w a n y t e s t z
r y s . U m o |l i w i a o n p o r ó w n a n i e
l i c z b y k o m ó r e k m i g r u j c y c h w g r u p i e
k o n t r o l n e j ( b e z s u b s t a n c j i ) z l i c z b
k o m ó r e k m i g r u j c y c h w g r u p i e
K o n t r o l a
b a d a n e j ( z o d p o w i e d n i m i s t |e n i a m i
s u b s t a n c j i ) . L i c z e n i e k o m ó r e k
z a s i e d l a j c y c h o b s z a r r y s y w y k o n a n e j
w z w a r t e j m o n o w a r s t w i e , u m o |l i w i a
o k r e [l e n i e z d o l n o [c i d o h a m o w a n i a
p r z e z s u b s t a n c j p r o c e s ó w
p r z e m i e s z c z a n i a s i k o m ó r e k
Z a h a m o w a n i e
( z w i z a n e j z e z d o l n o [ t w o r z e n i a
m i g r a c j i
p r z e r z u t ó w w p r z y p a d k u w i e l u
n o w o t w o r ó w ) .
k o m ó r e k
N e u t r a l R e d ( N R )
W y c h w y t c z e r w i e n i o b o j t n e j
p o l e g a n a p o b i e r a n i u b a r w n i k a N R
( b d c e g o s Ba b y m k a t i o n e m ) , p r z e z |y w e
k o m ó r k i i g r o m a d z e n i u g o w l i z o s o m a c h
( p H l i z o s o m ó w < p H c y t o p l a z m y , c o
u m o |l i w i a N R w i z a n i e s i m i e j s c a m i
a n i o n o w y m i d o m a c i e r z y l i z o s o m a l n e j ) .
K o m ó r k i m a r t w e l u b u s z k o d z o n e n i e
p o b i e r a j N R . D o d a t k o w o i l o [
p o c h Bo n i t e g o b a r w n i k a j e s t w p r o s t
p r o p o r c j o n a l n a d o i l o [c i |y w y c h k o m ó r e k
c o u m o |l i w i a p r z e p r o w a d z e n i e p o m i a r u
m e t o d a m i s p e k t r o f o t o m e t r y c z n y m i .
M o r f o l o g i a k o m ó r e k b a r w i o n y c h
N R .
a ) R T G - 2 ( g o n a d y O n c o r h y n c h u s m y k i s s )
b ) P L H C - 1 ( n o w o t w ó r w t r o b y P o e c i l i o p s i s
l u c i d a )
c ) S H - S Y 5 Y ( l u d z k a n e u r o b l a s t o m a ) p o 2 4 h
e k s p o z y c j i n a d ) 1 e ) 2 0 f ) 5 0 m g / m l c h l o r k u
c y n k u .
B a r w i e n i e b Bk i t e m t r y p a n u
P r o s t e b a r w i e n i e d a j c e m o |l i w o [ o c e n y |y w o t n o [c i p o p u l a c j i k o m ó r e k .
B a r w n i k p r z e n i k a d o k o m ó r e k p r z e z u s z k o d z o n b Bo n k o m ó r k o w , b a r w i c j e n a
n i e b i e s k o . N i e p o z w a l a r o z r ó |n i k o m ó r e k n e k r o t y c z n y c h i a p o p t o t y c z n y c h .
K o m ó r k a u m i e r a j c a n a d r o d z e
a p o p t o z y
" L i c z n e p o f a Bd o w a n i a b Bo n y k o m ó r k o w e j .
" Z a g s z c z e n i e c y t o p l a z m y w w y n i k u u t r a t y w o d y p r z e z
k o m ó r k .
" Z m n i e j s z e n i e o b j t o [c i k o m ó r k i .
" K o n d e n s a c j a c h r o m a t y n y i j e j l o k a l i z a c j a w p o b l i |u b Bo n y
j d r o w e j .
" O b k u r c z a n i e j d r a k o m ó r k o w e g o i j e g o f r a g m e n t a c j a .
" F r a g m e n t a c j a D N A n a o d c i n k i b d c e w i e l o k r o t n o [c i
n u k l e o s o m ó w ( 1 8 0 - 2 0 0 p a r z a s a d ) .
" P o w s t a w a n i e c i a Be k a p o p t o t y c z n y c h .
K o m ó r k i u m i e r a j c e n a d r o d z e n e k r o z y
1 . P o w s t a j a g r e g a t y c h r o m a t y n y , d o c h o d z i d o p r z y p a d k o w e j
d e g r a d a c j a D N A .
2 . Z w i k s z e n i o b j t o [ k o m ó r k i , p c z n i e n i e o r g a n e l l i o r a z i c h
r o z p a d .
3 . D r a s t y c z n y s p a d e k p o z i o m u A T P w k o m ó r c e .
4 . C y t o p l a z m a u l e g a s i l n e j w a k u o l i z a c j i .
5 . U s z k o d z e n i e b Bo n p o w o d u j e |e z a w a r t o [ k o m ó r e k w y l e w a
s i d o p r z e s t r z e n i m i d z y k o m ó r k o w e j .
6 . I n d u k c j a s t a n u z a p a l n e g o .
7 . K o m ó r k i u t w o r z c h a r a k t e r y s t y c z n e s k u p i s k a , j a k o |e
n e k r o z a o b e j m u j e z w y k l e z w a r t e g r u p y k o m ó r e k
W y k r y w a n i e a p o p t o z y
B a r w i e n i e h e m a t o k s y l i n i
e o z y n
" H e m a t o k s y l i n a b a r w n i k
z a s a d o w y , Bc z c y s i z
b i a Bk a m i j d r a w y b a r w i a j c j e
H e m a t o k s y l i n a E o z y n a Y
n a n i e b i e s k o . U m o |l i w i a o c e n
s t o p n i a k o n d e n s a c j i
c h r o m a t y n y i o b s e r w a c j c i a Be k
a p o p t o t y c z n y c h
" E o z y n a b a r w n i k k w a s o w y ,
w y b a r w i a b i a Bk a c y t o p l a z m y n a
r ó |o w o
a p o p t o t y c z n e
h e p a t o c y t y b a r w i o n e
e o z y n i h e m a t o k s y l i n
W y k r y w a n i e a p o p t o z y b a r w i e n i a
f l u o r o s c e n c y j n e .
F l u o r e s c e n c y j n e b a r w i e n i e
o r a n |e m a k r y d y n y ( O A ) i
b r o m k i e m e t y d y n y ( B E ) .
C z s t e c z k i b a r w n i k a i n t e r k a l u j
p o m i d z y d s D N A , c o m o |n a
z a o b s e r w o w a w m i k r o s k o p i e
f l u o r e s c e n c y j n y m . O A w n i k a j c
d o j d e r k o m ó r e k
a p o p t o t y c z n y c h z a w i e r a j c y c h
s k o n d e n s o w a n c h r o m a t y n
d o p r o w a d z a d o i n t e n s y w n e g o
z i e l o n e g o [w i e c e n i a ( s z c z e g ó l n i e
n a o b r z e |a c h ) . O A m a r ó w n i e |
z d o l n o [ d o Bc z e n i a s i z R N A
d o p r o w a d z a j d o e m i s j i
c z e r w o n e g o [w i a t Ba . N a t o m i a s t
L i m f o c y t y b a r w i o n e O A / B E
B E w n i k a d o k o m ó r e k z
u s z k o d z o n b Bo n , w y w o Bu j c
A ) P r a w i d Bo w a k o m ó r k a
c z e r w o n l u b p o m a r a Dc z o w
B ) K o m ó r k a z u s z k o d z o n b Bo n
f l u o r e s c e n c j j d r a .
C ) K o m ó r k i a p o p t o t y c z n e
D ) a r t e f a k t
B a r w i e n i e O A i B E
o r a n | a k r y d y n y
b r o m e k e t y d y n y
B a r w i e n i e j o d k i e m p r o p i d y n y i
H o e c h s t 3 3 3 4 2
j o d e k p r o p i d y n y
H o e c h s t 3 3 3 4 2 ( b i s - b e n z i m i d ) w z b u d z a n i e b i e s k i e
[w i e c e n i e j d r a k o m ó r e k |y w y c h Bc z c s i d o d s D N A w
m i e j s c a c h b o g a t y c h a A i T . N a t o m i a s t p o j e d y n c z e
c z s t e c z k i j o d k u p r o p i d y n y ( I P ) Bc z s i c o 4 - 5 p a r z a s a d
d o d s D N A u m o |l i w i a j c o b s e r w a c j c z e r w o n e j
f l u o r e s c e n c j i s k o n d e n s o w a n y c h j d e r k o m ó r e k
H o e c h s t 3 3 3 4 2
a p o p t o t y c z n y c h .
C i a Bk a a p o p t o t y c z n e
I n n e b a r w n i k i f l u o r e s c e n c y j n e ( U V )
D A P I ( 4 ' , 6 - d i a m i d y n o - 2 -
C . E l e g a n s
f e n y l o i n d o l ) z w i z e k
b a r w i o n y
i n t e r k a l u j c y u |y w a n y d o
D A P I
b a r w i e n i a j d e r i c h r o m o s o m ó w .
W U V [w i e c i n a n i e b i e s k o
R e d C M X R o s b a r w i
m i t o c h o n d r i a |y w y c h k o m ó r e k n a
R e d C M X R o s
c z e r w o n o
M i [n i e
g Ba d k i e
A l e x a F l u o r ( A F ) p o c h o d n e
s z c z u r a
k u m a r y n y , r o d a m i n y i k s a n t e n u
p o d d a n e s u l f o n a c j i ( R - S O 2 O - ) . A F
4 8 8 t o b a r w n i k s p r z |o n y z
f a l l o i d y n Bc z c s i s p e c y f i c z n i e
A l e x a F l u o r 4 8 8
z w Bó k n a m i F - a k t y n y . B a r w n i k i z t e j
b a r w i c y
g r u p y d z i a Ba j c e n a z a s a d z i e s d
w Bó k n a
m o l e k u l a r n y c h ( n p . s p r z |o n e z I g )
a k t y n o w e
u m o |l i w i a j c r ó |n o b a r w n e
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