-� Izolacja limfocytów ze śledziony:
1. Ułożyd mysz na prawym boku.
2. Odkazid skórę etanolem, a następnie naciąd i odciągnąd skórę.
3. Przeciąd otrzewnę i uwidocznid śledzionę.
4. Wyciąd śledzionę (jałowe nożyczki i pęsetka).
5. Umieścid śledzionę na szalce Petrie go z 10% MEM.
6.  Wyczesad śledzionę jałową igłą preparacyjną lub nożyczkami.
7. Zebrad płyn (z limfocytami) do probówki.
8. Odstawid zawiesinę na ok. 15 min. w celu oddzielenia się większych fragmentów
tkanki śledziony.
9. Zebrad klarowny płyn do probówek, wirowad  1500 rpm przez 5 min, a następnie
zlad supernatant.
10. Osad komórek zawiesid w 1ml 10% MEM.
-� Barwienie błękitem tryopanu:
�� Barwienie błękitem trypanu to proste barwienie dające możliwośd oceny żywotności
populacji komórek. Barwnik przenika do komórek przez uszkodzoną błoną
komórkową, barwiąc je na niebiesko. Nie pozwala rozróżnid komórek nekrotycznych
i apoptotycznych
-� Określenie żywotnośd limfocytów:
1. Pobrad próbkę zawiesiny komórek i rozcieoczyd 1:10 w PBS .
2. Dodad 4 krople 0,1% wodnego roztworu błękitu trypanu.
3. Kroplę zabarwionej zawiesiny nanieśd na szkiełko podstawowe i nakryd szkiełkiem
nakrywkowym.
4. Policzyd 100 komórek, określając jaki procent komórek zabarwił się koloidowym
barwnikiem (są to komórki martwe).
5. Wynik wyrazid w procencie żywych komórek.