107204

WIROWANIE NA GRADIENTACH GESTOSC1

•    zasada: polega na różnicach pomiędzy gęstością względną użytego gradientu a wielkością i masą izolowanych komórek

•    cechy gradientów gęstości: niska lepkość, izoosmotyczne w stosunku do płynów ustrojowych, nietoksyczne, niezdolne do penetracji przez błony biologiczne i łatwe do odpłukania z oczyszczonej zawiesiny komórkowej

•    najczęściej stosowane gradienty:

❖    mieszanina Ficoll-Uropolina (Ficoll - hydrofilny polimer cukrozy, Uropolina -rozpuszczalnik dla Ficollu) - izolacja limfocytów z krwi obwodowej i z innych płynów ustrojowych oraz rozdział komórek nowotworowych od limfoidalnych

♦> gradient Pcrcollu wielostopniowy, tzn. skokowy (Percoll - koloidalna krzemionka pokryta poliwinylopyrolidonem) - do rozcieńczenia stosuje się 0,15-molowy NaCl; rozdział limfocytów T od B, izolacja komórek NK, izolacja monocytów i granul ocytów krwi

❖    FCS (roztwór surowicy cielęcej) - rozdział komórek nowotworowych od limfoidalnych

•    wykonanie: na przygotowany odpowiednio gradient nawarstwia się ostrożnie zawiesinę komórkową i wiruje (w odpowiednich warunkach); po odwirowaniu poszczególne populacje komórkowe są rozdzielone wzdłuż gradientu i daną populację komórek zbiera się ostrożnie i dokładnie odpłukuje