• modulacja inicjacji i wzrostu kalusu • promowanie podziałów komórkowych | ||
Gibereliny |
Gibberallic amid GAI, GA2. GA3 (tj. Kwas giberelowy -najbardziej poznana giberelina), GA4, itd. |
• Stymulacja wydłużania pędów • Uwalnianie nasion, zarodów i pąków wierzchołkowych z uśpienia • Paclobutrazol i ancymidol hamują syntezę giberelin czego efektem są krótsze pędy i promowanie tworzenia bulw i cebul |
Kwas abscyzynowy |
Abscisic amid |
• Stymulacja tworzenia cebul i bulw • Stymulacja dojrzewania zarodków • Promowanie rozpoczęcia spoczynku |
poliaminy |
Putrescine spermidine |
• Promocja tworzenia korzenił przybyszowych • Promowanie somatycznej embriogenezy • Promowanie tworzenia pędów |
Metody dostarczania DNA do komórki.
1. transformacja za pośrednictwem Agrobacterinm
■ A. tumefaciens
■ A. rhizogenes (włosowatość korzeni)
■ Zawiesiny komórek, eskplantaty, infiltracje organów i In planta.
2. metody bezpośrednie
■ metoda PEG (protoplasty - glikol polietylenowy)
■ elektroporacja protoplastów
■ włókna węgliku krzemowego
■ mikroiniekcja protoplastów - wstrzykiwanie DNA do protoplastów
■ karabinek genetyczny - cząstki złota z DNA
Wymogi transformacji roślin:
• system dostarczenia DNA (tani, wydajny, prosty)
• kultury komórkowe i system regeneracji roślin
• skolonowany DNA
0 selekcyjny gen markerowi (reporterowy - ekspresja w sposób prosty, ujawniona)
0 promotor (odpowiedzialny za wzór danego genu)
■ konstytutywny - nie zależy od warunków, np. fizjologicznych, zawsze pozostaje aktywny
■ można na różne sposoby ( np. światło) indukować, działa tylko kiedy go uaktywnimy
■ region kodujący - na jego bazie powstaje Pre mRNA
■ sekwencje poliadenylacji - ważna rola w transporcie mRNA z jądra komórkowego do cytoplazmy
Jeśli któryś w powyższych wymogów nie jest spełniony nie możemy mówić o transformacji rośliny.
Dowody dzielimy na:
• genetyczne, potwierdzenie, że gen przekazany jest dalej na drodze naturalnej