110411

11. Enzymy restrykcyjne

E a) trawią ONA w obrąbie swoje] sekwenqi rozpoznania lub w jej sąsiedztwie

■    b) trawią DNA wyłącznie w obrąbie swqej sekwencji rozpoznania

B c) trawa ONA wyłącznie w saaedztwie swojej sekwenqi rozpoznania

■    d) trawią DNA w obrąbie swojej sekwenqi rozpoznania lub w jej sąsiedztwie, ale w odległości me mniejszej mZ 10 pzod kortców fragmentu ONA

12    Do aktywności endonukleaz restrykcyjnych E a) nlezbednesa.jony magnezowe

■    b) niezbędny jest magnez

■    c) niezbędny jest DTT

® d) niezbedne są jony chlorkowe

13    Dibotreitol (DTT) jest stosowany w buforach do enzymOw restrykcyjnych, gdyż

■    a) zabezpiecza DNA przed utlenieniem

H b)powodu|e redukcją mostków disiarczkowych enzymu

■    c) chelatując jony magnezowe zabezpiecza ONA przed nukleazami E d) zabezpiecza grupy holowe enzymów przed utlenieniem

14 Student i Studentka z ab a wał se trawieniem plazmidowego DNA przy pomocy endonukleaz y restrykcyjnej EooRI do formy liniowej z tym ze Studentka zapomniała dodać enzymu, buforu I nie pamiątała, na którą eaaZką naniosła przygotowywane przez siebie DNA. Czy mozeoe Państwo pomoc Studentce i wskazać, która to moZebyć SbeZka?    12    3    4

■    a) 1 lub 2

■    b) 1 lub 4 E c)3 lub 4

■    d) 1 lub 3

15

■

E

16

E

17.

E

Enzymy restrykcyjne Masy IIS. czyli shittery

a)    mają te same sekwenqe rozpoznania, ale różne nazwy

b)    trawią DNA poza swoją sekwenqa rozpoznania

c)    rozpoznają wyłącznie sekwenqe pałndromiczne

d)    mają rożne sekwencje rozpoznania, ale te same nazwy

Kto miał szanse na większą liczbą klonowz insertami czy Student, który klonował fragment restrykcyjny uzyskany przez trawienie enzymem EcoRV (GAT*ATC) do unikalnego miejsca restrykcyjnego Smal (CCC*GGG). czy Studentka, która klonowała fragment uzyskany przez trawienie enzymem flgfll (A*GATCT) do miejsca SamHI (G*<5ATCC)?

a)    Studentka, gdyż fragmenty DNA trawione przez Studenta różnymi enzymami restrykcyjnymi nie mogą zostać zligowane

b)    Studentka. gdy2 fragmenty DNA o tępych końcach ligowane są mmej wydatnie ntz fragmenty o kompatybilnych końcach lepkich

c)    Student, gdyż w klonowaniu wykonywanym przez Studentką w ogolę n»e mogła zajsc ligacja

d)    Student, gdyż igaqa DNA o końcach tępych jest bardziej wydajna mz ligaqa DNA o kompatybilnych końcach lepkich

Kto uzyskał klony z insertami: czy Student która klonował produkt PCR trawiony enzymem BspOI <AT*CGAT) do wektora pobawionego do formy liniowej enzymem Ciel (AT*CGAT). czy Studentka która klonowała produkt PCR pobawiony enzymem Smal (CCC*GGG) do miejsca Xmal (C*CCGGG)?

a)    Studentka. gdy2 fragmenty DNA trawione przez Studenta róZnymi enzymami restrykcyjnymi nie mogą zostać zligowane

b)    Studentka. gdy2 fragmenty DNA o kompatybilnych lepkich końcach ligowane są wydajnej niz fragmenty o końcach tępych

c)    Student, jjdyz w fragmenty DNA w doświadczeniu wykonywanym przez Studentką w ogóle nie mogły zostać zfrgowane

d)    Student gdyż tgowane przez niego fragmenty DNA nie b/y ufosforylowane na końcach 5'

18

E

19

E

Kto uzyskał większą liczbę fragmentów DNA Student który otrzymał 10»ig produktu PCR owielkoso 300 pz. czy Studentka która otrzymała 5pg DNA owtełkoso 100 pz?

a)    Studentka

b)    Student

c)    uzyskał te sama łczbe fragmentów

d)    Student, ale nie moZna tego racjonalnie uzasadnić

Czy można wklonowac gen do jednego wektora dwóch czesaach tak zęby był czynny (np jeden fragment zawiera sekwenqe wiązania rybosomów i kodon start, drugi pozostałe kodonyj?

a)    tak

b)    można wklonowac. ale gen nie bądzie aktywny, bo me można go precyzyjnie połączyć C) nie. bo me moZna zapewnić wzajemnej onentaqi tych fragmentów

d) tak ale me można zapewnić wzajemnej orientacji łych fragmentów

20

E

W celu uzyskania wydajnej ekspresy genu NIE należy klonować

a)    w miejsce Sgfll

b)    w miejsce SamHI

aple    TTaremofr ^    i    jW

*6łlCtCWrccceCCi4*ri»*T»CClCTC*CT»TłBSS»C»tCAC**CSCtltCCCtCr»6*i»T*AtTITSTTT»*OTTiic*»SMU

c)    np w miejsce Ndol

d)    pomiądzy miejsca rtmdllł-Xł»l

_*11”* _BmHiecćK, gaci *5* re«i»t wS! xkoi

T»T*CłUrBSC-MC*-MCTOSTS6W«C**łTCBSTC««*tCCauiTC««CTCCeTCOACM«TTOCOOCCCC*ĆTCe*Bt«C«C*CC*CC*tC*CTM IWt»I oj. r n. , r1 yO 1 yC I «C rlW 161 yAr* I yS«rC I >S**C I ut •_u*r_qAr₄e t "A I oCy»C I y*rqlhrArgA I oTfo*r<#r&co*roL m

2