101911

Azotany powodują spadek ekspresji genów zaangażowanych w biosyntezę AF.

•    Ważne - obecność miejsca wiążącego AreA w rejonie międzygenowym pomiędzy aflR i aflS.

•    Badana tu ekspresję 9 genów, ale nie na macierzach (chyba na PCR)

•    Białko AreA z A.parasiticus jest zdolne do wiązania się z tym rejonem.

•    Obecność azotanu powodowała zwiększenie aktywności wiązania AreA do tego regionu i tym samym zwiększenia ekspresji aflS.

9.4    Regulacja biosyntezy AF - pH:

•    Środowisko kwaśne bardziej sprzyja produkcji AF niż alkaliczne

•    Transkrypty klastra ulegały represji w zasadowym środowisku w porównaniu do kwaśnego

•    Represja genów klastra w zasadowym środowisku (wybrano kilka genów, które badano i regulatorowe geny aflR i aflS nie ulegały zmianie, ale inne geny tak)

9.5    Regulacja biosyntezy AF - metale/ związki śladowe:

•    Od 1960 wiadomo, że metale ciężkie są ważnymi czynnikami niezbędnymi do akumulacji dużych ilości AF (szczególnie cynk)

•    Dostępność metali jest bardzo ważne (jeśli dodamy do podłoża EDTA to zostanie zahamowana biosynteza AF), ponieważ nastąpi chelatacja metali

•    Miedź ma natomiast hamujący wpływ na biosyntezę AF

•    Przeprowadzone na poziomie molekularnym badania wpływu metali na biosyntezę AF wykazały, że mieszanina jonów miedzy, żelaza i cynku powoduje znaczący wzrost całkowitego RNA, biomasy, transkrypcji genu aflP i ilości AF

•    Techniką RT-PCR mierzono ekspresję genu dehydrogenazy alkoholowej i odkiyto. że jej ilość wzrasta w hodowlach z dodatkiem metali ciężkich u F.graminearium i A.f\avus

•    Dehydrogenaza alkoholowa aflH (lub adhA) jest genem, który znajduje się w klastrze biosyntezy AF i jest niezbędna do przekształcenia 5'-hydroksyawerantyny do awerufiny

RT-PCR:

•    mRNA

• odwrotna transkrypcja

• otrzymujemy DNA

•    ilość powstałego DNA mierzy się spektrofotometrycznie

•    intensywność spektrofotometryczna, która jest miarą ilości mRNA, świadczy o intensywności ekspresji genów

9.6    Regulacja biosyntezy AF -stres oksydacyjny:

•    Stres oksydacyjny stymuluje produkcję AF

•    Anty-oksydanty (kwas galusowy w orzechach) hamują produkcję AF

•    Kwas galusowy powoduje hamowanie kilku genów AF włączanie w to aflM

•    Kwas kofeinowy- antyoksydant wychwymje wolne rodniki i wtedy jest źle dla biosyntezy AF - stres oksydacyjny sprzyja produkcji AF

•    Knockout genu dysmutazy nadtlenkowej u A.flavus powoduje spadek produkcji AF

•    Czynnik transkrypcyjny Yapl odgrywa ważną rolę w regulacji biosyntezy AF

•    Mutanty z delecją yapl u A.parasiticus mają zdolność do zwiększonej akumulacji AF

•    Przypuszcza się, że Yapl może wiązać się do promotora aflR

9.7    Regulacja biosyntezy AF - temperatura:

•    Wpływ temp na biosyntezę AF jest niezależny od substratu

•    Produkcja AF spada w sposób liniowy wraz ze wzrostem lub spadkiem temperatury poza optimum (28-30stC)