84539

a)    Do 10 probówek chemicznych ponumerowanych zgodnie z tabelą 2 dodano po 0,5ml 1/15 buforu fosforanowego o pH 5,6 oraz po 5ml 2% sacharozy-substratu.

b)    Próbki umieszczono w łaźniach wodnych o różnych temperaturach (zgodnie z tabelą 2) i inkubowano przez 5 min.

c)    Wyjęto probówki z łaźni i przygotowano stoper.

d)    Do probówek nieprimowanych dodano po 0,5 ml enzymu i zaczęto odmierzać czas (lOmin.)

e)    Do probówek primowanych dodano po 0,5 ml wody destylowanej.

f)    Wszystkie próbki dobrze zamieszano, włożono do łaźni jak wcześniej i prowadzono inkubacje dokładnie przez 10 min (od momentu ,w którym dodano enzymu),

g)    Po 10 min pobrano po 0,1 ml każdej mieszaniny reakcyjnej i dodano do przygotowanych wcześniej probówek kali browanych z odczynnikiem miedziowym zgodnie z tabelą 1 (przerwano reakcje).

h)    Do probówek 7,7'-11,11' dodano po 0,4 ml wody destylowanej.

i)    Próby 1-11' inkubowano 20 min w 100°C w celu stworzenia optymalnych warunków do przebiegu reakcji z odczynnikiem miedziowym.

j)    Oziębiono probówki w zimnej wodzie.

k)    Dodano po 0,5ml odczynnika arseno-molibdenowego i dobrze zamieszano.

l)    Roztworu dopełniono wodą destylowaną do objętości 5 ml (zgodnie z podziałką na probówkach kalibrowanych) i ponownie zamieszano.

m)    Odczytano absorbancje prób 1-11' przy długości fali 660 nm wobec odnośnika (próbki 1), a wyniki zanotowano w tabeli 1.

5. Tabele pomiarowe

Tabela 1.

Nr probówki	V odczynnika miedziowego (ml)	V standardu glukozy (ml)	V HjOdm (ml)	Próby £♦$ przygotowanie wg tabeli 2.		V odczynnika arseno- molibdenowego (ml)	A$60	A^kor/	Masa gkikozy (pg|
1	0,5	-	0,5			0,5	odnośnik	-	0
2	0,5	0,1	0,4			0,5	0,070	-	5
3	0,5	0,2	0,3			0,5	0,106	-	10
4	0,5	0,3	0,2			0,5	0,256	-	15
5	0,5	0,4	0,1			0,5	0,149	-	20
6	0,5	0,5	-	Nr	V (ml)	0,5	0,257	-	25
7	0,5	-	0,4	12	0,1	0,5	0,147	0,083	9,222
7'	0,5	-	0,4	12'	0,1	0,5	0,064
8	0,5	-	0,4	13	0,1	0,5	0,336	0,297	33,000
8'	0,5	-	0,4	13'	0,1	0,5	0,039
9	0,5	-	0,4	14	0,1	0,5	0,554	0,491	54,556
9'	0,5	-	0,4	14'	0,1	0,5	0,063
10	0,5	-	0,4	15	0,1	0,5	0,543	0,472	52,444
10'	0,5	-	0,4	15'	0,1	0,5	0,071
11	0,5	-	0,4	16	0,1	0,5	0,052	0	0
11'	0,5	-	0,4	16'	0,1	0,5	0,052

Tabela 2.

V buforu

V sacharozy

t rei

V enzymu [ml]

V HA*g [ml]