50

Szkio i inne pomoce

Na 1 studenta przypada: 7 kolbek stożkowych na 100 ml, lejek, 10 probówek chemicznych, 1 zlewka (400-600 ml), pipety chemiczne: 2 na 1 ml, 2 na 2 ml, 1 na 5 ml i 1 na 20 ml, 2 kolbki miarowe na 25 ml. Ponadto do oznaczenia cukrów roślinnych 1 kolbka miarowa na 10 ml, 1 chłodni czka.

Wykonanie

1.    Oznaczanie sacliarydów w materiale roślinnym. Otrzymany w kolbce miarowej homogenat (6), tj. próbę do oznaczenia, uzupełnić wodą destylowaną do kreski. Po dokładnym wymieszaniu roztwór przesączyć do kolbki stożkowej przez sączek z bibuły. Pierwszą porcję przesączu —jako przypadkowo rozcieńczoną wodą znajdującą się na ściankach kolbki i na lejku — należy odrzucić.

Celem oznaczenia ilości sacharydów redukujących po hydrolizie, wraz z sacharynami bezpośrednio redukującymi, należy odmierzyć do probówki 5 ml uzyskanego przesączu i dodać 1 ml 6-molowego kwasu solnego (2 ). Probówkę przykryć chłodniczką i umieścić we wrzącej łaźni wodnej na 30 min. Następnie zawartość probówki schłodzić i zobojętnić dodając 1 ml 6-molowego wodorotlenku sodowego (3 ). Zobojętniony hydrolizat przenieść ilościowo do kolbki miarowej o pojemności 10 ml (przepłukując kilkakrotnie probówkę małymi porcjami wody), uzupełnić wodą do kreski, dokładnie wymieszać i do bezpośredniego oznaczenia kolorymetrycznego odmierzyć do 2 probówek po 2 ml tego roztworu.

Sacharydy bezpośrednio redukujące ze względu na ich mniejsze stężenie od sacharydów ogółem oznacza się przed hydrolizą w nie rozcieńczonym przesączu. Do oznaczeń pobiera się po 2 ml przesączu do 2 probówek.

2.    Oznaczanie sacharydów w mleku. Otrzymane w kolbce miarowej o pojemności 25 ml mleko (7 ) uzupełnić wodą do kreski i dokładnie wymieszać. Odmierzyć do probówki 5 ml tego roztworu, dodać 5 ml 10-proc. kwasu trichlorooctowego (4) i po wymieszaniu pozostawić na 20 min w celu dokładnego wytrącenia osadu. Wytrącone białka oddzielić na małym średnio zwartym sączku z waty. 5 ml klarownego przesączu przenieść do kolbki miarowej o pojemności 25 ml, uzupełnić wodą, wymieszać i do bezpośredniego oznaczenia kolorymetrycznego pobrać do 2 probówek po 2 ml roztworu.

Równolegle wykonać oznaczenie laktozy o znanym stężeniu (5 ), pobierając do oznaczenia kolorymetrycznego 1 i 2 ml roztworu standardowego. Przy pobraniu 1 ml uzupełnić wodą do 2 ml.

3.    Oznaczanie kolorymetryczne. Oznaczenie kolorymetryczne wykonuje się dla wszystkich prób w dw'óch równoległych powtórzeniach. Do probówek zawierających po 2 ml badanych roztworów dodać po 2 ml roztworu kwasu 3,5-dinitrosalicylowego (7 ), wymieszać i umieścić we wrzącej łaźni wodnej na 10 min. Równolegle przygotować próbę kontrolną zawierającą zamiast badanego roztworu 2 ml w^rody. Następnie próby oziębić, przenieść ilościowo do kolbek stożkowych zawierających po 20 ml wody (przepłukując kilkakrotnie probówki roztworem z kolbki) i zmierzyć absorbancję przy długości fali 550 nm, nastawiając kolorymetr na zero wnbec próby kontrolnej.

40