39

Szkło i inne pomoce

Na 1 studenta przypada: 1 szalka Petriego o <p 20 cm, 1 szalka Petriego o <{> 5-8 cm, a na stół — 4 mikropipety na 0,1-0,2 ml, 1 suszarka do włosów, 1 rozpylacz fryzjerski.

Wykonanie

Ćwiczenie studenci wykonują indywidualnie. Kwadratowy arkusik bibuły chromatograficznej (2 ) o wymiarach 22 x 22 cm należy umieścić na czystym kawałku bibuły filtracyjnej, zwykłym ołówkiem narysować na środku okrąg o średnicy 3 cm i zaznaczyć na jego obwodzie 6 jednakowo od siebie oddalonych punktów. Stanowią one miejsca nakroplenia. 4 wzorcowych aminokwasów’: proliny (2 ), leucyny (.3 ), lizyny (4 ) i cystyny (5 ), ich mieszaniny oraz próby otrzymanej w celu identyfikaqi zawartych w niej aminokwasów. W środku okręgu należy za pomocą korkoboru o średnicy 4 mm wyciąć otwór i umieścić w nim knot, sporządzony przez zwinięcie skrawka bibuły o wymiarach 2,5 x 6,0 cm. W zaznaczonych na okręgu punktach 1-4 nakroplić po 10 ^1 aminokwasów wzorcowych, w punkcie 5 nanieść po 10 pi wszystkich czterech aminokwasów', a w punkcie 6 ok. 20 [xl otrzymanego do identyfikacji roztworu. Poszczególne roztwory należy nanosić małymi kropelkami o średnicy plamek nie przekraczającej 5 mm, susząc je każdorazowo w strumieniu ciepłego powietrza suszarki fryzjerskiej (przed nakropleniem przećwiczyć na skrawku czystej bibuły kąt nachylenia pipetki i czas jej zetknięcia z bibułą).

Po naniesieniu na bibułę wszystkich roztworów, do szalki Petriego o średnicy 5-8 cm należy w^rlać fazę rozwijającą (6 ), szalkę tę umieścić w połówce szalki Petriego o średnicy 20 cm i położyć na krawędziach większej szalki arkusz bibuły tak, aby dolny koniec knota był zanurzony w’ rozpuszczalniku. Przykryć ją drugą połows szalki o identycznej średnicy (por. rys. 7). Chromatogram rozwijać od momentu dojścia frontu fazy ruchomej możliwie blisko krawędzi szalki, co trwa 1,5-2,0 godzin, następnie arkusz wyjąć i wysuszyć w suszarce lub w strumieniu ciepłego powietrza pod wyciągiem.

Wysuszony chromatogram należy następnie spryskać roztworem izatyny (7), używając rozpylacza fryzjerskiego i wysuszyć w suszarce o temp. ok. 110°C. Chrorriatogram należy załączyć do sprawozdania.

Uwaga! Po wyjęciu chromatogramu wylać z szalki fazę rozwijającą nie popłukując szalki.

Opracowanie wyników

Natychmiast po pojawieniu się barwnych prążków należy obrysować ich kontury zwyczajnym ołówiriem (barwna plama jest nietrwała) i zanotować zabarwienie plam. Następnie zmierzyć i obliczyć wartości Rf dla poszczególnych aminokwasów wzorcowych oraz zawartych w otrzymanej do identyfikacji próbie. Przez porównanie wartości Rf oraz barwy plam aminokwasów’ wzorcowych i zawartych w otrzymanej do zbadania próbie wnioskować, jakie aminokwasy otrzymano do identyfikacji.