30

Szkło i inne pomoce

Na 2 studentów przypada: 20 probówek ze statywem, 1 zlewka na 400-600 ml, 2 pipety serologiczne na 1 ml, 2 pipety chemiczne na 1 ml. 1 pipeta serologiczna na 5 ml. Dla każdego studenta dodatkowo 1 kolba miarowa odpowiedniej objętości.

Wykonanie

1.    Sporządzanie krzywej wzorcowej. Do probówek odmierzyć w 2 powtórzeniach po 1 mi z 5 kolejnych roztworów wzorcowych białka (3 ), a do próby kontrolnej zamiast białka odmierzyć 1 ml wody. Do wszystkich probówek dodać po 5 ml odczynnika miedziowego (/), wymieszać i po 10 min dodać po 0.5 ml odczynnika Folina (2 ) i całość wymieszać. Po 30 min zmierzyć intensywność zabarwienia w fotometrze (przy 670 nm)'nastawiaiąc przyrza.d na zero w^robec próby kontrolnej. Na podstawie uzyskanych ■wartości absorbancji (A) wykreślić krzywe zależności absorbancji od ilości białka w próbie.

2.    iOznaczanie zawartości białka \np. w mleku). Roztwór białka (mieka) otrzymany w kolbce miarowej na 50 ml naiezy aopemić do kreski wodą i dokładnie wymieszać. Do 2 probówek odmierzyć po i mi roztworu z koibki i dalej postępować jak przy sporządzaniu krzywej wzorcowej. Próbę kontrolną potrzebną przy pomiarze sporządzić równolegle z próbą badaną lub użyć próby przygotowanej przy sporządzaniu krzywej wzorcowej.

Opracowanie wyników

Studenci wykonują krzywą wzorcową na papierze milimetrowym nanosząc na wykres punkty odpowiadające wartościom z obu pownórzeó dla każdego stężenia. Niezależnie w sprawozdaniu należy podać odczyty absorbancji dla obu powtórzeń i dla każdego stężenia białka oraz wyliczone w^rartości średnie.

Przy oznaczaniu zawartości białka naieży z wartości absorbancji odczytać na krzywej zawartość białka w 1 ml i w całej próbie oraz wyliczyć procentową zawartość białka w badanym materiale.

Sposób przygotowania roztworu z tego materiału (mieka) podany będzie na tablicy, a liczba otrzymanych przez studenta mi roztworu wyjściowego zostanie podana przez prowadzącego ćwiczenia — po przedstawieniu przez studenta wyników pomiaru fotometrycznego (absorbancji).

Pytania

yk i. Wymienić cechy budowy białek, które są wykorzystywane przy ich ilościowym oznaczaniu.

2.    Scharakteryzować zasady, na których opierają się poszczególne metody oznaczania zawartości białka.

3.    Określić przydatność poszczególnych metod w ilościowym oznaczaniu białek.