3784496410

Warstwę ziemi okrzemkowej na filtrze przemyć następnie 40 cm³ acetonu. Połączone przesącze (ekstrakt i aceton z przemywania ziemi okrzemkowej) zagęścić na wyparce do sucha. Suche pozostałości rozpuścić w 20 cm³ metanolu, mieszając zawartości kolb na mieszadle magnetycznym. Po 10 minutach mieszania zawartości kolby w otrzymanym roztworze oznaczyć stężenie makrolidu takrolimus metodą HPLC.

Uwaga!: procedurę powtórzyć dla każdej badanej próbki.

Oznaczenie wykonuje się metodą standardu zewnętrznego w warunkach: kolumna ODS, detekcja UV przy długości fali 214 nm, przepływ 1 cm³/min, faza ruchoma acetonitryl/woda 75/25, objętość iniekcji 20 pi. Uzyskany z odczytu z krzywej kalibracyjnej wynik (stężenie makrolidu w 20 cm³ metanolu) przeliczyć na stężenie w brzeczce (metoda podana w opisie ćwiczenia 3).

Czynności wykonywane przez grupę ćwiczeniowa:

-    likwidacja hodowli w fermentorze połączona z pobraniem ostatniej (6-tej) próbki

-    wyznaczanie wydajności wzrostu szczepu, obliczenie specyficznej szybkości wzrostu szczepu oraz wydajności biosyntezy makrolidu tacrolimus i oznaczenie stężenia glukozy dla badanych próbek na podstawie próbek pobranych w czasie prowadzonej hodowli, z wykorzystaniem wyników uzyskanych dla próbek 0 i 5.

-    zestawienie danych uzyskanych przez wszystkie podgrupy w jeden wspólny wykres, obrazujący wzrost szczepu, zużycie źródła węgla z podłoża i biosyntezę idiolitu w funkcji czasu. Wyciągnięcie wniosków dotyczących kinetyki wzrostu szczepu i biosyntezy lacrolimusu (elementy optymalizacji procesu biosyntezy).

Przygotowanie sprawozdania z przebiegu czwartego ćwiczenia (wykonuje każda podgrupa):

Wyznaczanie wydajności wzrostu szczepu:

Numer próbki	0	1	2	3	4	5
Objętość próbki [cm^1]
Masa sączona [g]
% Zawartości suchej masy
Sucha masa [g]
Wydajność hodowli [ g s.m./L]